白藜芦醇通过上调SOCS-1蛋白调节牙髓卟啉单胞菌脂多糖引起的成骨细胞氧化应激反应的实验研究

作     者：米靖 

作者单位：中国医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：仇丽鸿

授予年度：2019年

学科分类：1006[医学-中西医结合] 10[医学] 100602[医学-中西医结合临床] 

主      题：白藜芦醇 氧化应激 SOCS-1 牙髓卟啉单胞菌 脂多糖 

摘      要：目的:慢性根尖周炎是细菌感染性疾病,其发生与氧化应激（oxidative stress,OS）密切相关,如何通过抑制氧化应激反应减轻组织损伤程度成为近几年研究热点。白藜芦醇（resveratrol,Res）被证实具有很强的抗氧化作用,可以清除活性氧并抑制其产生。细胞因子信号转导抑制因子-1（suppressor of cytokine signaling-1,SOCS-1）是调节细胞因子信号转导通路的蛋白质分子,参与氧化应激的调控过程。本实验旨在探索Res对牙髓卟啉单胞菌脂多糖（Porphyromonas endodontalis,P.e）脂多糖（lipopolisaccharide,LPS）刺激小鼠成骨细胞发生氧化应激后的抗氧化作用,以及检测SOCS-1在此过程中的变化,为Res的临床应用提供理论依据。研究方法:采用不同浓度P.e-LPS及Res刺激MC3T3-E1细胞不同时间,通过MTT法观察细胞增殖情况,选择P.e-LPS最佳浓度及时间点进行后续实验;细胞分为空白组、LPS组、Res组、LPS+Res组,采用荧光显微镜及流式细胞术检测细胞内氧化应激程度;不同浓度Res刺激细胞1h后,western blot检测细胞内SOCS-1的蛋白表达水平;western blot筛选下调SOCS-1表达的siRNA序列,建立SOCS-1在小鼠成骨细胞中低表达的瞬时转染细胞系;细胞分为转染组、转染对照组、LPS+Res组,其中转染组使用转染细胞,转染对照组使用转染对照序列,LPS+Res组使用未转染细胞,荧光显微镜及流式细胞术检测细胞内氧化应激程度;所有实验重复三次,采用单因素方差分析及Dunnett t检验进行统计学分析,以P0.05为差异有统计学意义。结果:MTT结果显示10mg/LP.e-LPS及10μMRes处理细胞24h不能影响细胞生存率,采用10mg/LP.e-LPS及10μMRes进行后续实验,其中LPS组+Res组先用Res预处理1h后,P.e-LPS刺激24h;荧光显微镜观察及流式细胞术检测显示LPS组与空白组相比细胞内氧化应激程度明显提高,而LPS+Res组氧化应激程度显著低于LPS组（P0.05）;不同浓度Res处理细胞1h后,western blot检测发现细胞内SOCS-1蛋白逐渐升高;荧光显微镜及流式细胞术检测显示转染组细胞内氧化应激程度明显高于转染对照组及未转染组（P0.05）。结论:Res可以抑制P.e-LPS引起的小鼠成骨细胞内氧化应激反应,其抗氧化作用与SOCS-1蛋白有关。