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牙髓卟啉单胞菌脂多糖对小鼠成骨细胞表达MCP-1的影响

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上海口腔医学 2018年第1期27卷 1-5页

作者：李晓琳于雅琼仇丽鸿郭佳杰邵丽娜王丝墨杨谛中国医科大学口腔医学院牙体牙髓病学教研室辽宁沈阳110002 辽宁省口腔医学研究所牙体牙髓病学研究室辽宁沈阳110002

目的 :探讨牙髓卟啉单胞菌(Porphyromonas endodontalis,P.endodontalis)脂多糖对小鼠成骨细胞表达单核细胞趋化蛋白1(monocyte chemotactic protein-1,MCP-1)m RNA和蛋白的影响,以及是否有p38丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路和核因子κB(Nuclear Factor-κB,NF-κB)信号通路的参与。方法 :以不同质量浓度的P.endodontalis脂多糖(0~50 mg/L)刺激MC3T3-E1细胞24 h;以20 mg/L P.endodontalis脂多糖作用于细胞不同时间(0~48 h)后,采用实时反转录PCR和酶联免疫吸附测定检测MCP-1m RNA和蛋白的表达。采用p38MAPK抑制剂SB203580和NF-κB抑制剂BAY11-7082分别预处理细胞1 h,检测其对P.endodontalis脂多糖刺激MC3T3-E1细胞后MCP-1m RNA表达的影响。采用SPSS 13.0软件包对结果进行单因素方差分析和Dunnett t检验。结果:不同质量浓度的P.endodontalis脂多糖(0~50 mg/L)刺激MC3T3-E1细胞后,MCP-1的m RNA表达和蛋白分泌呈剂量依赖性;观察时间内(0~48 h),20 mg/L P.endodontalis脂多糖作用于MC3T3-E1细胞后,MCP-1 m RNA的表达和蛋白分泌呈时间依赖性;10 mol/L的SB203580和BAY11-7082分别预处理细胞1 h,可以降低P.endodontalis脂多糖诱导MCP-1 m RNA的表达,且SB203580的抑制作用强于BAY11-7082。结论:P.endodontalis脂多糖可能通过激活p38MAPK和NF-κB信号通路诱导成骨细胞表达MCP-1m RNA和蛋白。

关键词：牙髓卟啉单胞菌脂多糖单核细胞趋化蛋白1 成骨细胞信号通路

牙髓卟啉单胞菌内毒素诱导成骨细胞表达炎症因子的信号通路研究

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华西口腔医学杂志 2010年第2期28卷 135-138页

作者：杨谛仇丽鸿李任李子木李琛中国医科大学口腔医院牙体牙髓科中国医科大学口腔医学院中心实验室辽宁沈阳110002

目的检测细胞外信号调节激酶(ERK)1/2和p38丝裂原活化蛋白激酶抑制剂对牙髓卟啉单胞菌内毒素(LPS)诱导成骨细胞白细胞介素(IL)-1β mRNA和IL-6 mRNA的影响,探讨根尖周病变牙槽骨吸收的可能病理机制。方法成骨细胞MG-63经PD98059和SB203... 详细信息

目的检测细胞外信号调节激酶(ERK)1/2和p38丝裂原活化蛋白激酶抑制剂对牙髓卟啉单胞菌内毒素(LPS)诱导成骨细胞白细胞介素(IL)-1β mRNA和IL-6 mRNA的影响,探讨根尖周病变牙槽骨吸收的可能病理机制。方法成骨细胞MG-63经PD98059和SB203580预处理1h后,加入牙髓卟啉单胞菌LPS作用6h,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测IL-1β mRNA和IL-6 mRNA的表达水平。结果PD98059预处理后,牙髓卟啉单胞菌LPS诱导MG-63表达IL-1β mRNA的水平下降。SB203580预处理后,牙髓卟啉单胞菌LPS诱导MG-63表达IL-1β mRNA和IL-6 mRNA水平均下降。结论牙髓卟啉单胞菌LPS诱导MG-63细胞表达IL-1β mRNA依赖ERK1/2和p38MAPK信号转导通路,表达IL-6 mRNA依赖p38MAPK信号转导通路。

关键词：牙髓卟啉单胞菌内毒素成骨细胞细胞外信号调节激酶1/2 p38丝裂原活化蛋白激酶

牙髓卟啉单胞菌脂多糖对成骨细胞p38丝裂原活化蛋白激酶和细胞外信号调节激酶1、2表达的影响

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上海口腔医学 2012年第4期21卷 389-392页

作者：吕游贾舸仇丽鸿包穆蓉于雅琼郭艳中国医科大学口腔医学院牙体牙髓科辽宁沈阳110002 合肥市口腔医院牙体牙髓科安徽合肥230001 中国医科大学口腔医学院中心实验室辽宁沈阳110002

目的:探讨牙髓卟啉单胞菌(P.e)脂多糖(LPS)对小鼠成骨细胞株MC3T3-E1细胞ERK1/2和p38表达的影响。方法:用10μg/mL的P.e-LPS分别作用于成骨细胞0、5、15、30、60、180 min,应用蛋白质印迹技术检测成骨细胞内磷酸化ERK1/2和p38表达水平... 详细信息

目的:探讨牙髓卟啉单胞菌(P.e)脂多糖(LPS)对小鼠成骨细胞株MC3T3-E1细胞ERK1/2和p38表达的影响。方法:用10μg/mL的P.e-LPS分别作用于成骨细胞0、5、15、30、60、180 min,应用蛋白质印迹技术检测成骨细胞内磷酸化ERK1/2和p38表达水平的变化。采用SPSS11.0软件包对结果进行单因素方差分析和Dunnett t检验。结果:10μg/mL的P.e-LPS刺激后,成骨细胞内p38迅速被活化,5～30 min为激活高峰(P<0.01),60 min后基本恢复至正常水平;ERK1/2磷酸化水平在P.e-LPS刺激5 min后明显增加,15 min后磷酸化水平最高(P<0.01),30 min后磷酸化水平下降。结论:P.e-LPS可诱导成骨细胞MC3T3-E1的p38和ERK1/2蛋白表达增强,Pe-LPS可能通过p38和ERK1/2对成骨细胞发挥作用。

关键词：牙髓卟啉单胞菌脂多糖成骨细胞 p38丝裂原活化蛋白激酶细胞外信号调节激酶1、2

牙髓卟啉单胞菌内毒素对成骨细胞分化的抑制作用

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上海口腔医学 2021年第4期30卷 350-354页

作者：王瑞杨谛于雅琼郭佳杰仇丽鸿中国医科大学口腔医学院·附属口腔医院牙体牙髓病科辽宁省口腔疾病重点实验室中国医科大学口腔医学院中心实验室辽宁沈阳110002

目的 :研究牙髓卟啉单胞菌脂多糖(P.e-LPS)对成骨细胞分化的影响,探讨P.e-LPS在根尖周骨吸收疾病中的致病机制。方法:厌氧条件下培养P.e,应用热酚水法提取P.e-LPS,采用凝胶鲎试剂法对所提取的LPS进行定性分析。应用成骨细胞分化培养基(5... 详细信息

目的 :研究牙髓卟啉单胞菌脂多糖(P.e-LPS)对成骨细胞分化的影响,探讨P.e-LPS在根尖周骨吸收疾病中的致病机制。方法:厌氧条件下培养P.e,应用热酚水法提取P.e-LPS,采用凝胶鲎试剂法对所提取的LPS进行定性分析。应用成骨细胞分化培养基(50μg/mL抗坏血酸、6 mmol/Lβ甘油磷酸钠)诱导前成骨细胞系MC3T3-E1向成骨细胞分化。实时定量PCR(RT-PCR)检测成骨分化基因Distal-less homeobox 5(DLX5)、Runt-related transcription factor2(Runx2)、Osterix、骨涎蛋白(bone sialoprotein,BSP)、骨钙素(osteocalcin,OCN)以及胶原(Collagen)的表达。碱性磷酸酶(ALP)活性测定、茜素红染色以及Von Kossa染色检测成骨细胞的矿化水平。应用siRNA转染,沉默P.e-LPS的受体Toll-like receptor-4(TLR-4)在成骨细胞中的表达。采用SPSS 11.0软件包对数据进行统计学分析。结果 :P.e-LPS(10μg/mL)作用于MC3T3-E1细胞3 d,与对照组相比,成骨分化基因DLX5、Runx2、Osterix、OCN、BSP、胶原的mRNA表达水平显著下降(P<0.05)。P.e-LPS(10μg/mL)分别作用于MC3T3-E1细胞7 d和14 d,ALP活性及茜素红染色强度下降。P.e-LPS分别作用于siRNA-TLR-4转染组及对照组7、14、21 d,与对照组相比,si-TLR-4组细胞的成骨分化基因表达水平、ALP活性、茜素红染色强度以及Von Kossa染色强度均显著高于对照组(P<0.05)。结论:P.e-LPS通过受体TLR-4抑制成骨细胞的分化,从而参与根尖周病变的骨吸收过程。

关键词：牙髓卟啉单胞菌脂多糖 Toll样受体4 成骨分化

牙髓卟啉单胞菌脂多糖对小鼠成骨细胞表达MIP-1α的影响

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上海口腔医学 2017年第3期26卷 263-267页

作者：于雅琼李晓琳仇丽鸿郭佳杰杨谛郭艳中国医科大学口腔医学院牙体牙髓病科辽宁沈阳110002 辽宁省口腔医学研究所牙体牙髓病学研究室辽宁沈阳110002 辽宁省口腔疾病转化医学研究中心辽宁沈阳110002 中国医科大学口腔医学院中心实验室辽宁沈阳110002

目的:探讨牙髓卟啉单胞菌(Porphyromonas endodontalis,P.e)脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)对成骨细胞产生巨噬细胞炎性蛋白1α(macrophageinflammatoryprotein-1α,MIP-1α)m RNA和蛋白分泌的影响,以及姜黄素对此过程产生的抑制作用。方法:以20 mg/L P.e-LPS作用细胞不同时间(0~48 h)后,采用实时反转录聚合酶链反应(real-time reverse transcription-polymerase chain reaction,real-time RT-PCR)和酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测MIP-1αm RNA和蛋白的表达。以同样方法检测姜黄素对20 mg/L P.e-LPS刺激MC3T3-El细胞后MIP-1αm RNA和蛋白表达的影响。采用SPSS 13.0软件包对结果进行单因素方差分析和Dunnett t检验。结果:在观察时间内(0~48 h),20 mg/L P.e-LPS作用MC3T3-El细胞后,MIP-1αm RNA的表达和蛋白的分泌具有时间依赖性。10 mol/L姜黄素预处理细胞1 h,可以降低P.e-LPS诱导的MIP-1αm RNA和蛋白的表达水平。结论:P.e-LPS可以诱导成骨细胞表达和分泌MIP-1α,姜黄素对此过程发挥明显的抑制作用。

关键词：牙髓卟啉单胞菌脂多糖成骨细胞巨噬细胞炎性蛋白1α 姜黄素

牙髓卟啉单胞菌脂多糖对小鼠成骨细胞表达IL-34 mRNA的影响

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上海口腔医学 2017年第1期26卷 37-41页

作者：于雅琼郭佳杰仇丽鸿李晓琳杨谛郭艳中国医科大学口腔医学院牙体牙髓病科辽宁沈阳110002 辽宁省口腔医学研究所牙体牙髓病学研究室辽宁沈阳110002 辽宁省口腔疾病转化医学研究中心辽宁沈阳110002 中国医科大学口腔医学院中心实验室辽宁沈阳110002

目的 :探讨牙髓卟啉单胞菌(Porphyromonas endodontalis,P.e)脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)对成骨细胞产生白介素34(interleukin-34,IL-34)m RNA表达的影响及此过程是否有p38MAPK、ERK1/2、NF-κB和SIRT1蛋白的参与。方法:以不同浓度P.e-LPS(0~50 mg/L)刺激MC3T3-El细胞和以20 mg/L P.e-LPS作用细胞不同时间(0~24 h)后,采用实时反转录聚合酶链反应(real-time RT-PCR)检测IL-34 m RNA的表达。以同样方法检测NF-κB抑制剂BAY 11-7082、p38MAPK抑制剂SB203580、ERK1/2抑制剂PD98059、沉默调节蛋白1(sirtuin1,SIRT1)激动剂白藜芦醇(resveratrol,RES)和SIRT1抑制剂EX-527对P.e-LPS刺激MC3T3-El细胞后IL-34 m RNA表达的影响。采用SPSS 13.0软件包对结果进行单因素方差分析和Dunnett t检验。结果 :不同浓度P.e-LPS(0~50 mg/L)刺激MC3T3-El细胞后,IL-34 m RNA的表达具有剂量依赖性。20 mg/L P.e-LPS作用MC3T3-El细胞24 h时,IL-34 m RNA的表达量最大;48 h时,IL-34 m RNA的表达量有所下降。10 mol/L BAY-117082、SB203580、PD98059预处理细胞1 h,可以降低P.e-LPS诱导的IL-34 m RNA的表达水平。50 mol/L RES下调P.e-LPS诱导小鼠成骨细胞表达IL-34 m RNA,而10 mol/L EX-527则上调IL-34 m RNA的表达。结论:P.e-LPS可诱导成骨细胞表达IL-34 m RNA,其机制可能是激活p38MAPK、ERK1/2、NF-κB和SIRT1信号通路。

关键词：牙髓卟啉单胞菌脂多糖成骨细胞白介素34 信号通路

牙髓卟啉单胞菌诱导成骨细胞表达RANKL mRNA的研究

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实用口腔医学杂志 2005年第5期21卷 583-586页

作者：李秀兰侯志明艾红军薛明沈阳中国医科大学口腔医学院 110002

目的研究牙髓卟啉单胞菌(porphyromonasendodontalis,Pe)ATCC35406对成骨细胞表达细胞核因子kappaB受体活化因子配基(receptoractivatorofnuclearfactor-kappaBligand,RANKL)的影响,探讨该菌诱导牙槽骨吸收的病理机制。方法采用原代培养的大鼠头盖骨细胞,分别以107、109CFU/ml的Pe感染细胞24h,为了观察细菌毒性作用的动力学变化,以107CFU/ml的Pe作用细胞0、6、12、18及24h,逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测RANKLmRNA的表达。结果以107和109CFU/mlPe作用成骨细胞24h后,细胞表达RANKLmRNA与βactin的mRNA灰度值的比值分别为1.73、2.44。大鼠头盖骨细胞基础表达RANKLmRNA为0.32。以107CFU/mlPe感染细胞,随着感染时间的增加,细胞RANKLmRNA表达逐渐增强为0.93、2.01、1.97、1.73。结论Pe通过刺激成骨细胞RANKL的表达,激活OPG/RANKL/RANK(骨保护因子osterprotegerinOPG,细胞核因子kB受体活化因子receptoractivatorofnuclearfactor-kappaB,RANK)传导系统,能够诱导牙槽骨吸收,并且其作用具有密度依赖性和时间依赖性。

关键词：牙髓卟啉单胞菌成骨细胞细胞核因子kB受体活化因子配基

牙髓卟啉单胞菌超声提取物对成骨细胞周期和凋亡的影响

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实用口腔医学杂志 2015年第2期31卷 188-191页

作者：田亚光廖天安陈小滨王普武邱乐宏海南省人民医院口腔科海口570102

目的:观察牙髓卟啉单胞菌超声提取物对成骨细胞周期和凋亡的影响。方法:用不同浓度牙髓卟啉单胞菌超声提取物(1、10、100μg/ml)作用成骨细胞,MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞仪分析细胞周期分布和凋亡变化。结果:牙髓卟啉单胞菌超声提... 详细信息

目的:观察牙髓卟啉单胞菌超声提取物对成骨细胞周期和凋亡的影响。方法:用不同浓度牙髓卟啉单胞菌超声提取物(1、10、100μg/ml)作用成骨细胞,MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞仪分析细胞周期分布和凋亡变化。结果:牙髓卟啉单胞菌超声提取物显著抑制成骨细胞的增殖。且在一定时间和浓度范围内具有浓度和时间依赖性。10μg/ml和100μg/ml提取物作用24 h时,处于G1期的成骨细胞明显增多;在作用48 h时,牙髓卟啉单胞菌提取物以浓度依赖方式促进成骨细胞凋亡。结论:牙髓卟啉单胞菌超声提取物可阻滞细胞于G1期,并诱导细胞凋亡,抑制成骨细胞增殖。

关键词：牙髓卟啉单胞菌超声提取物细胞周期凋亡

不同氢氧化钙制剂对牙髓卟啉单胞菌的杀菌效果

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上海口腔医学 2012年第2期21卷 149-153页

作者：都婷婷仇丽鸿贾舸杨谛郭艳中国医科大学口腔医学院牙体牙髓科辽宁省口腔医学研究所牙体牙髓病学研究室辽宁沈阳110002 中国医科大学口腔医学院中心实验室辽宁沈阳110002

目的:比较Endocal、Calxyl、国产氢氧化钙糊剂、Vitapex 4种氢氧化钙制剂对牙髓根尖周主要致病菌牙髓卟啉单胞菌(Porphyromonas endodontalis,P.e)活性的影响。方法:(1)通过动态比浊法比较在直接接触条件下不同氢氧化钙制剂不同作用时... 详细信息

目的:比较Endocal、Calxyl、国产氢氧化钙糊剂、Vitapex 4种氢氧化钙制剂对牙髓根尖周主要致病菌牙髓卟啉单胞菌(Porphyromonas endodontalis,P.e)活性的影响。方法:(1)通过动态比浊法比较在直接接触条件下不同氢氧化钙制剂不同作用时间对牙髓卟啉单胞菌的抑制作用。(2)选取新鲜拔除的人单根管牙85颗,经根管预备、高压消毒灭菌后,置入P.e菌悬液,建立牙髓卟啉单胞菌感染模型。将模型采用抽签法随机分为5组,即Endocal组、Calxyl组、国产氢氧化钙糊剂组、Vitapex组、无菌去离子水对照组。分别于封药前和封药7d后,用无菌纸捻在根管中取样,细菌培养计数菌落,并完成细菌24h回复实验。采用SPSS11.0软件包对数据进行统计学处理。结果:Endocal、Calxyl、国产氢氧化钙糊剂、Vitapex均能有效减少牙髓卟啉单胞菌的数量(P菌清除率均达95%以上。动态比浊法检测结果显示,Endocal、国产氢氧化钙糊剂抑菌作用优于其他组,有显著性差异(P菌培养法结果显示,Endocal组细菌清除率显著大于Vitapex组(P牙髓卟啉单胞菌均有较好的抑制作用,其中,Endocal的抗菌作用优于Vitapex。

关键词：氢氧化钙牙髓卟啉单胞菌抑菌活性