双酚A暴露与子宫肌瘤关联性初探

作     者：万晓君 

作者单位：东南大学 

学位级别：硕士

导师姓名：许茜;曹玲

授予年度：2018年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：双酚A 子宫肌瘤 尿液 固相萃取 超高效液相色谱-串联质谱 内暴露 

摘      要：本研究基于固相萃取结合超高效液相-串联质谱法(SPE–UPLC–MS/MS),建立了人体尿液中双酚A(BPA)的测定方法,从流行病学的角度探讨其与子宫肌瘤的关联性。51例子宫肌瘤患者作为病例组,43例非子宫肌瘤且非激素相关性疾病的妇女为正常组,66例宫颈炎患者(轻度宫颈炎6例、中度宫颈炎30例、重度宫颈炎30例)为阴性对照组,分别收集尿液。尿液样本加入四溴双酚A(TBBPA)作为内标,经β-葡萄糖酸酐酶和硫酸酯酶水解后,通过预先处理过的Supelclean C18固相萃取小柱提纯、浓缩。采用Waters Acquity UPLC BEH?C18色谱柱(100mm×2.1mm×1.7mm),以0.01mol·L乙酸铵水溶液和甲醇作为流动相进行梯度洗脱,三重四极杆串联质谱采用电喷雾离子源负离子(ESI)电离,多反应监测(MRM)模式进行定性和定量分析。方法学验证结果显示,该方法在1-100ng·mL范围内,BPA的浓度与峰面积比呈良好线性关系,相关系数不小于0.995(R=0.9978);检出限(S/N=3)和定量限(S/N=10)分别为0.1ng·mL和0.3ng·mL。高、中、低浓度(1ng·mL、5ng·mL、20ng·mL)加标回收率为82.56%-108.50%,相对标准偏差(RSD)低于15%。该方法简单,准确,选择性好,灵敏度高,分析速度快,满足生物样本的分析要求。将该方法应用于正常组、阴性对照组和病例组尿液样本中BPA的含量测定,以探讨BPA的内暴露与子宫肌瘤疾病的关联性。43例正常组尿液中检出BPA的为42例,检出率为97.7%,暴露分布为1.51ng·mL(0.60ng·mL,2.57ng·mL);66例阴性对照组尿液中检出BPA的为61例,检出率为92.4%,暴露分布为1.97ng·mL(0.96ng·mL,3.27ng·mL);51例病例组尿液中检出BPA的为50例,检出率为98.0%,暴露分布为5.18ng·mL(2.74ng·mL,13.98ng·mL)。采用非参数检验比较三组间BPA暴露水平的差异。结果显示,病例组尿液中BPA水平显著高于正常组和阴性对照组(P0.05),但正常组和阴性对照组之间以及阴性对照组中轻度、中度、重度宫颈炎患者之间BPA水平无显著差异(P﹥0.05)。采用spearman相关分析得到,BPA的暴露水平和子宫肌瘤的数目、大小无显著相关性(P﹥0.05)。本研究结果揭示,BPA在人体尿液中的暴露普遍存在,且BPA的暴露水平与子宫肌瘤疾病的发生有一定的关联性。本研究为评价人体BPA内暴露水平提供了可靠的分析方法,并为进一步研究雌激素依赖性妇科肿瘤的发生与BPA暴露的相关性提供了一定的科学依据。