胆固醇栓塞缺血性卒中：动物实验与蛋白质组学研究

作     者：曹灿 

作者单位：郑州大学 

学位级别：硕士

导师姓名：李震

授予年度：2019年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100204[医学-神经病学] 10[医学] 

主      题：缺血性脑卒中 血栓 胆固醇 蛋白组学 动脉粥样硬化 

摘      要：目的:脑卒中发病率高、死亡率高、致残率高,对我国城乡居民的健康构成了极大威胁。其主要分为缺血性和出血性两大类,约80%的脑卒中患者都是由于脑缺血造成的,最常见的缺血性脑卒中两种类型为大动脉粥样硬化斑块破裂引起的胆固醇栓塞性脑卒中与心源性疾病引起的血栓栓塞性脑卒中。虽然有关缺血性脑卒中病理生理学方面的研究不计其数,但是到目前为止还没有使用胆固醇栓子和血栓栓子来构建动物模型并进行蛋白组学比较的研究。因此为了探究胆固醇栓塞所导致的缺血性脑卒中相比于血栓栓塞性脑卒中,其在急性期到底有着怎样的独特的病变表现与特异的蛋白质表达谱,本研究从动物实验与蛋白质表达谱两个角度尝试去探索胆固醇栓塞性脑卒中与血栓栓塞性脑卒中二者在急性期有何差异表现,以期能够发现二者差异表现并探索其潜在的发生机制,从而为临床工作中更好的实施精准治疗提供启发与帮助。方法:采用微栓子栓塞大鼠脑缺血模型,对胆固醇栓子、血栓栓子与对照组三组大鼠进行TTC染色、Evans Blue染色、HE染色,采用Longa评分进行行为学评分,并使用TMT标记蛋白质谱技术进行蛋白质表达谱检测,差异蛋白进行GO分析、KEGG分析和富集分析。统计学使用SPSS 21.0软件处理数据,非配对t检验进行数据分析,当P0.05时认为此时差异具有统计学意义。结果:胆固醇栓塞组脑组织梗死体积较血栓组小,胆固醇栓子栓塞组6小时梗死体积为7.86±3.73%,血栓栓子栓塞组6小时为20.08±9.23%,P0.005;而在24小时,梗死体积分别为20.08±3.62%与25.39±4.81%,P0.05。且胆固醇栓子栓塞组梗死灶数量大于血栓组,术后6小时,胆固醇栓子栓塞组梗死灶个数39.67±9.58要明显多于血栓组28.13±8.64,P0.05;术后24小时,分别为36.60±5.602与26.50±4.76,P0.005。在血脑屏障损伤方面两者无显著性差异。胆固醇栓子组相比血栓组存在差异表达蛋白,表达上调的蛋白有泛素蛋白连接酶E3C等11个蛋白,表达下调的蛋白有小凹蛋白等5个蛋白,GO分析提示差异蛋白主要集中于酶活性的正向与反向调控等生物学过程,高尔基复合体是差异蛋白较为集中的区域。KEGG通路分析提示细胞黏附途径、补体与凝血途径、细胞内吞途径是差异蛋白参与较多的信号转导途径。结论:本研究中,我们发现胆固醇栓塞性脑卒中相比血栓栓塞性脑卒中,梗死体积较小同时梗死灶数量较多,急性期蛋白谱表达存在差异。这为今后研究动脉粥样硬化斑块脱落所致脑卒中的独特分子机制提供了新的思路与起点,同时也为缺血性脑卒中临床标志物的探索提供了方向。