MiR-3031通过靶基因POU2F3调控奶山羊乳腺发育的研究

作     者：SELEH-ZO Emeline Diane Mariam（李若兰） 

作者单位：西北农林科技大学 

学位级别：硕士

导师姓名：曹斌云

授予年度：2019年

学科分类：0905[农学-畜牧学] 09[农学] 

主      题：奶山羊 miRNAs 基因表达 上皮细胞 调节 

摘      要：microRNAs是一类短的,高度保守的非编码RNA,可调节基因的表达。MiR-3031作为一个功能性miRNA,参与调节奶山羊乳腺发育和泌乳等多种重要的生物学过程。本试验旨在研究POU2F3和miR-3031在奶山羊乳腺上皮细胞中的靶向关系及其功能,为奶山羊乳腺发育和泌乳提供理论依据。通过RT-qPCR,Western blot和构建双荧光素酶报告载体验证miR-3031与POU2F3的靶向调节作用。生物信息学分析表明,POU2F3的3’UTR区包含miR-3031的结合位点。同时,miR-3031降低了PsiCHECKTM2-POU2F3 3’UTR-wt的双荧光素酶活性。RT-qPCR和Western blot结果显示,与对照组NC相比,miR-3031 mimics显著降低POU2F3的mRNA和蛋白水平的表达;结果表明POU2F3是miR-3031的靶基因。转染miR-3031 24h、48h后CCK8检测miR-3031对奶山羊乳腺上皮细胞活力的影响。结果显示,miR-3031 mimic显著提高奶山羊乳腺上皮细胞的活力。转染siPOU2F3 24h后EDU检测奶山羊乳腺上皮细胞增殖的情况,结果显示,干扰POU2F3显著促进奶山羊乳腺上皮细胞的增殖。将siPOU2F3和si-NC转染到乳腺上皮细胞中,进一步研究POU2F3对奶山羊乳腺上皮细胞凋亡的作用机理。流式结果表明,siPOU2F3显著抑制奶山羊乳腺上皮细胞凋亡。同时,siPOU2F3显著抑制Bcl-2和Bax蛋白的表达,上调Bcl-2/Bax的比率;同时,检测AKT和mTOR的磷酸化水平。结果表明,siPOU2F3显著上调了AKT、mTOR的磷酸化水平和PTEN的蛋白水平以及显著下调PI3K蛋白的表达。综上所述,miR-3031靶向POU2F3通过AKT/mTOR信号通路促进奶山羊乳腺上皮细胞增殖,抑制凋亡。