艾滋病热毒蕴结证特异性mRNA表达的研究

作     者：李海斌 

作者单位：成都中医药大学 

学位级别：硕士

导师姓名：冯全生

授予年度：2016年

学科分类：100506[医学-中医内科学] 1006[医学-中西医结合] 1005[医学-中医学] 10[医学] 100602[医学-中西医结合临床] 

主      题：艾滋病 热毒蕴结证 实时荧光定量核酸扩增检测 

摘      要：目的探讨艾滋病热毒蕴结证与差异mRNA表达的相关性,以期发现艾滋病热毒蕴结证的特异性表达mRNAs,探索其形成的分子生物学本质,为艾滋病中医证候诊断的客观化提供实验依据。方法本研究在前期芯片筛选的结果中通过查阅相关文献及数据分析选取艾滋病热毒蕴结证差异基因10条。10条基因是:CHP1、APOBEC3F、CDA、GGT1、CHI3L1、ZEB1、KLF10、ATAD1、SP3、IL7R。运用实时荧光定量 PCR 技术(Quantitative Real-time PCR,qRT-PCR)对采集的艾滋病期热毒蕴结证、无症状期热毒蕴结证及正常对照组的血液标本进行上述目的mRNA的mRNA表达量检测,以GAPDH作为内参基因进行标准化,对目的基因的2-ACT值来表示其相对表达量。运用SPSS V20.0统计软件分析目的mRNA在艾滋病期组、无症状期组和正常对照组之间的的差异表达关系。结果1)艾滋病期组与正常对照组比较:CHI3L1、CDA、APOBEC3F在艾滋病期热热毒蕴结证患者中表达下调,且差异有统计学意义(P0.05)。SP3、IL7R无统计学差异,表达上下调也与芯片结果不一致。2)无症状期组与正常对照组比较:CHP1、APOBEC3F、CDA、GGT1在艾滋病期热热毒蕴结证患者中表达下调,且差异有统计学意义(P0.05)。SP3、IL7R无统计学差异,表达上下调也与芯片结果不一致。3)艾滋病期组与无症状期组比较:CHI3L1在艾滋病期与无症状期均表达下调,且两组间差异具有统计学意义(P0.05)。结论1.艾滋病期热毒蕴结证和无症状期热毒蕴结证的特异性表达mRNA存在差异,在艾滋病期热毒蕴结证中的特异性表达mRNA是:CHI3L1,主要涉及Th1/Th2反应、炎性细胞活化与凋亡、新生血管生成、组织修复与重塑等功能可能是艾滋病期热毒蕴结证的形成的生物学本质;在无症状期热毒蕴结证的特异性表达mRNA是:CHP1、GGT1,主要涉及细胞的生长和凋亡、炎症调节、氧化应激反应、抑制肿瘤细胞的生长等功能,这可能是导致无症状期热毒蕴结证形成的生物学本质。2.艾滋病期热毒蕴结证和无症状期热毒蕴结证亦具有共同的特异性表达mRNA:CDA、APOBEC3F,这两个基因在上述两期中的表达无显著差异,提示这两条基因与艾滋病分期无关,与艾滋病热毒蕴结证有关。上述基因的作用主要涉及胞苷脱氢反应、抑制HIV的复制等,可能在艾滋病的病理生理过程中发挥重要的调控作用。