顺铂对肾母细胞瘤细胞株体外影响的初步研究

作     者：周家华 

作者单位：广西医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：王红

授予年度：2019年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：肾母细胞瘤 增殖 迁移 凋亡 Bax蛋白 

摘      要：目的初步探讨不同浓度的顺铂（Cisplatin,DDP）,对肾母细胞瘤瘤株的抑制作用,为相关的动物实验提供前期工作和一定的理论依据。方法1.CCK-8法检测细胞增殖活力:在96孔板上培养两癌株（SK-NEP-1/G401）,按加入顺铂的量将癌株分为6组,于24,48,72h后加入CCK-8,测量其在450nm处的光密度（OD值）,并进行统计学分析2.划痕实验检测细胞迁移能力:在24孔板上培养两癌株,按加入顺铂的量将癌株分为6组,用枪头比着直尺垂直划线,于0,24,48h观察细胞的迁移情况,拍照细胞迁移情况,计算划痕愈合率%=（0 h划痕区域像素-24、48 h划痕区域像素）/0 h划痕区域像素x100%,并进行统计学分析3.蛋白质免疫印迹（WB）测BAX蛋白含量:按加入顺铂的量将癌株分为6组,提取总蛋白,再用Western blot技术检测各组内的Bax蛋白和β-Actin蛋白的含量,计算Bax蛋白相对量,并进行统计学分析结果1.在接种细胞后的第24,48,72h,未加入顺铂组（0%组）的SKNEP-1/G401细胞在A450处OD值明显高于加入顺铂组（0.1%,0.2%,0.4%,0.8%及1.6%组）(p0.001),顺铂对SK-NEP-1/G401的增殖能力的最大抑制浓度为0.2%.4%。2.在接种细胞后的第0,24,48h,顺铂对SK-NEP-1/G401细胞在24h及48h的划痕愈合率具有明显差异（p0.001）,顺铂对SK-NEP-1迁移能力的最大抑制浓度为0.2%.4%。3.顺铂影响后Bax表达增加,0.2%组和0,4%组与对照组相比差异明显（p0.001）,顺铂引起SK-NEP-1中Bax蛋白明显增加的浓度为0%.2%;0.4%组与对照组相比差异明显（p0.001）,0.2%组与0.4%组之间差异明显（p0.001）,顺铂引起G401中Bax蛋白明显增加的浓度为0.2%.4%.结论1.顺铂能够抑制肾母细胞瘤SK-NEP-1/G401瘤株增殖能力,顺铂对SK-NEP-1/G401的增殖能力的最大抑制浓度为0.2%.4%。2.顺铂能够抑制肾母细胞瘤SK-NEP-1/G401瘤株迁移,顺铂对SKNEP-1迁移能力的最大抑制浓度为0.2%.4%。3.顺铂能够促进Bax蛋白的表达,可能是诱导细胞凋亡和癌行为能力降低的原因;顺铂引起SK-NEP-1中Bax蛋白明显增加的浓度为0%.2%,顺铂引起G401中Bax蛋白明显增加的浓度为0.2%.4%。4.顺铂对肾母细胞瘤SK-NEP-1/G401瘤株的抑制作用存在平台期