RAD18通过影响caspase-9-caspase-3依赖性凋亡通路作为直肠癌术前放化疗敏感性预测因子

作     者：严雪绮 

作者单位：南京医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：周俊东

授予年度：2019年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：RAD18 直肠癌 术前放化疗 细胞凋亡 

摘      要：目的:探讨RAD18表达对直肠癌术前同步放化疗敏感性的预测作用,研究RAD18对直肠癌细胞放化疗敏感性的影响及潜在分子机制,为直肠癌的个体化治疗提供新思路。方法:采用免疫组织化学方法检测直肠癌组织RAD18的表达,分析RAD18表达水平与直肠癌术前同步放化疗疗效的相关性。构建RAD18基因干扰载体sh RNA-RAD18及sh RNA-NC,转染直肠癌细胞HCT-116和DLD-1,通过CCK-8法和细胞集落形成实验检测RAD18对HCT-116和DLD-1细胞增殖的影响;采用免疫荧光实验和细胞凋亡实验分别检测RAD18对HCT-116和DLD-1在接受放化疗后胞核内γH2AX表达水平和细胞凋亡率的影响;采用western blot实验检测放化疗后HCT-116和DLD-1细胞内caspase-9和caspase-3的表达水平;构建裸鼠移植瘤模型,体内实验证实RAD18可通过caspase-9-caspase-3依赖性凋亡通路影响直肠癌放化疗敏感性。结果:RAD18表达水平与直肠癌术前同步放化疗临床缓解率成负相关(r=-0.3;p=0.03)。与对照组相比,抑制RAD18表达的HCT-116和DLD-1在放化疗后的细胞增殖率显著下降,细胞核内双链DNA损伤显著增加,凋亡相关蛋白caspase-9和caspase-3活化增多,细胞凋亡率上升,细胞放化疗敏感性显著增加。裸鼠移植瘤模型实验则在体内证实了抑制RAD18表达对直肠癌放化疗的增敏作用。结论:RAD18表达水平对局部晚期直肠癌患者术前同步放化疗敏感性有潜在的预测作用。抑制RAD18在直肠癌组织中的表达,可能是提高直肠癌细胞对放化疗敏感性的一项策略,对临床医生为直肠癌患者制定个体化治疗方案具有一定指导意义。