NAs治疗后cccDNA转录活性与HBV pgRNA、DNA和HBsAg动力学关系的体外研究

作     者：李慧姣 

作者单位：广西医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：江建宁

授予年度：2018年

学科分类：1004[医学-公共卫生与预防医学(可授医学、理学学位)] 100401[医学-流行病与卫生统计学] 10[医学] 

主      题：乙型肝炎病毒 HepG2.2.15细胞 cccDNA pgRNA HBsAg 

摘      要：目的探讨NAs治疗后cccDNA转录活性与HBV pgRNA、DNA和HBsAg的动力学关系,探索pgRNA作为cccDNA转录活性的新标志物的可行性。方法建立体外TDF抗病毒HepG2.2.15细胞模型,于基线、抗病毒12d、24d和36d收集细胞及上清液;提取细胞内总DNA,经PSAD消化、滚环扩增、跨缺口实时荧光PCR方法定量检测HBV cccDNA水平,Alu-PCR检测细胞内HBV S整合基因;应用实时荧光PCR方法定量检测细胞上清液HBV pgRNA和HBV DNA的水平;化学发光试剂检测细胞上清液HBsAg水平。评价未抗病毒时HepG2.2.15细胞模型功能稳定性;描绘TDF抗病毒后各标志物的时间-含量曲线,分析随治疗时间的延长HBV pgRNA、HBsAg、HBV DNA及cccDNA水平变化趋势。应用双变量相关性分析,分析各抗病毒后各检测点上清液HBV pgRNA、HBsAg、HBV DNA变化与肝细胞内cccDNA变化的相关关系。结果(1)未经TDF抗病毒的HepG2.2.15细胞内HBV cccDNA及上清液HBV DNA水平在基线最高,上清液HBsAg水平在培养12d达到分泌高峰;细胞内cccDNA与上清液DNA、HBsAg水平在培养36d内稳定分泌(F=0.604、0.823、1.284,P均0.05);而HBV pgRNA在培养12d达分泌高峰,培养36d内总体水平处于升高趋势(F=8.140,P0.05),与DNA变化幅度也均无相关性(r分别为-0.638、0.550、0.644,p均0.05)。结论(1)外体TDF抗病毒HepG2.2.15细胞模型可用于反映NAs后cccDNA转录活性及转录表达产物消长关系。(2)pgRNA反映细胞内cccDNA含量及转录活性优于HBsAg和HBV DNA,在HBV DNA阴转后有利于继续监测NAs抗病毒治疗效果。(3)pgRNA检测简单无创,作为NAs治疗监测cccDNA转录活性的指标具有广阔的临床应用前景。