六味补气胶囊对COPD模型大鼠膈肌疲劳的干预作用及PERK信号通路的影响

作     者：郭丽青 

作者单位：安徽中医药大学 

学位级别：硕士

导师姓名：刘向国

授予年度：2018年

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：六味补气胶囊 慢性阻塞性肺疾病 膈肌疲劳 内质网应激 PERK信号通路 

摘      要：1目的研究六味补气胶囊对COPD模型大鼠膈肌疲劳的干预作用及PERK信号通路的影响2方法选取雄性SPF级SD大鼠100只,随机选取15只作为正常对照组,其余大鼠采取气管滴入脂多糖加烟熏制作COPD模型,造模周期12周。模型成功标准依据大鼠肺功能改变和支气管、肺组织病理学变化。造模成功后将大鼠分为5组:模型组、氨茶碱组及六味补气胶囊低、中、高剂量组。正常对照组和模型组灌服生理盐水10ml/kg·d,氨茶碱组灌服氨茶碱混悬液2.3mg/kg·d(相当于成人常规临床用量的10倍),六味补气胶囊低、中、高剂量组采用六味补气胶囊混悬液灌服,剂量分别为0.265g/kg·d、0.53g/kg·d、1.06g/kg·d(相当于成人常规临床用量的5倍、10倍、20倍),以上给药均于造模第9周的第1天开始,每日2次,连续给药12周。治疗结束后测定各组大鼠肺功能;取出整块肺组织置于4%多聚甲醛溶液固定,HE染色检测支气管、肺组织及膈肌组织病理学变化;Western-blot法检测膈肌组织中GRP78、CRT、PERK、eIF2α、ATF4和CHOP蛋白水平;RT-qPCR法检测膈肌组织中GRP78、CRT、PERK、eIF2α、ATF4和CHOP mRNA水平。3结果3.1各组大鼠肺功能变化与正常对照组相比,模型组大鼠肺功能指数FVC、FEV0.3、FEV0.3/FVC、PEF明显降低(P0.05);六味补气胶囊高剂量组、六味补气胶囊中剂量组与六味补气胶囊低剂量组、氨茶碱组之间比较,差异具有统计学意义(P0.05)。3.2各组大鼠支气管、肺组织及膈肌组织病理学变化支气管、肺组织:正常对照组大鼠支气管粘膜上皮完整,纤毛排列整齐、明显可见;肺泡壁无明显增厚,肺泡腔干净、匀称。模型组大鼠普遍存在支气管纤毛上皮破损、坏死、脱落、纤毛减少、粘连和倒伏,杯状细胞增生,支气管壁有大量的炎性细胞浸润,部分支气管平滑肌明显增厚,管腔内有炎性细胞及粘液分泌物,呈慢性支气管炎病理学改变。肺泡结构大小不一,呼吸性细支气管及肺泡管、肺泡囊扩张,部分扩张呈不规则气腔;部分肺泡相互融合形成肺大泡,呈肺气肿病理学改变。氨茶碱组和六味补气胶囊各剂量组大鼠支气管、肺组织病理学变化有不同程度改善,支气管纤毛黏连、倒伏、缺失、变性坏死等改变减轻,杯状细胞减少,支气管壁炎性细胞浸润减轻,支气管平滑肌变薄,管腔内炎性细胞及粘液分泌物减少。肺泡腔减小,肺大泡减少。尤以六味补气胶囊高、中剂量组改变更为显著,呈剂量依赖性。膈肌组织:正常对照组大鼠膈肌纵切面肌纤维排列整齐、紧密,间质细胞少,肌横纹规则;横切面肌纤维大小一致。模型组大鼠膈肌纵切面肌纤维大小不一,部分肌纤维扭曲,肌横纹紊乱,肌间结缔组织增多,细胞数增加,横截面部分肌纤维不完整,肌纤维间隙增大。氨茶碱组和六味补气胶囊各剂量组大鼠膈肌纤维病理学变化有不同程度改善,纵切面肌纤维排列相对整齐,肌横纹相对规则,肌间结缔组织减少,细胞数减少;横截面肌纤维相对完整,肌纤维间隙减小。尤以六味补气胶囊高、中剂量组改变更为显著,呈剂量依赖性。3.3各组大鼠膈肌组织中GRP78、CRT、PERK、eIF2α、ATF4、CHOP表达的变化与正常对照组相比,模型组大鼠膈肌组织中GRP78、CRT、PERK、eIFf2α、ATF4、CHOP蛋白表达量明显升高;与模型组相比,六味补气胶囊各剂量组及氨茶碱组大鼠膈肌组织中GRP78、CRT、PERK、eIFf2α、ATF4、CHOP蛋白表达量都明显降低;各治疗组之间比较,六味补气胶囊高剂量组GRP78、CRT、PERK、eIFf2α、ATF4、CHOP蛋白表达量最低,其次为中剂量组、氨茶碱组、低剂量组。3.4各组大鼠膈肌组织中GRP78、CRT、PERK、eIF2α、ATF4和CHOP mRNA水平的变化与正常对照组相比,模型组大鼠膈肌组织中GRP78mRNA、CRTmRNA、PERKmRNA、eIFf2αmRNA、ATF4mRNA、CHOPmRNA均明显升高(P0.01);与模型组相比,六味补气胶囊各剂量组及氨茶碱组大鼠膈肌组织中GRP78mRNA、CRTmRNA、PERKmRNA、eIFf2αmRNA、ATF4mRNA、CHOPmRNA均显著降低(P0.01),其中,以六味补气胶囊高剂量组降低最为明显;六味补气胶囊高剂量组与六味补气胶囊中剂量、低剂量组比较,差异具有统计学意义(P0.01),六味补气胶囊高剂量组与氨茶碱组比较无