基于MAPK通路探讨盐酸小檗碱对大鼠主动脉内皮细胞的凋亡作用

作     者：梁宝今 

作者单位：右江民族医学院 

学位级别：硕士

导师姓名：梁涛

授予年度：2017年

学科分类：1006[医学-中西医结合] 10[医学] 100602[医学-中西医结合临床] 

主      题：盐酸小檗碱 主动脉内皮细胞 增殖 凋亡 MAPK 

摘      要：目的:使用盐酸小檗碱对大鼠主动脉内皮细胞进行干预研究,观察其增殖活性和凋亡情况,以探讨盐酸小檗碱促凋亡的相关分子机制,为抗血管生成治疗提供可能的药物干预方向。方法:25?mol/L,50?mol/L,75?mol/L浓度小檗碱分别干预大鼠主动脉内皮细胞24h,48h,72h。通过MTT方法检测内皮细胞的增殖活性。后续实验以25?mol/L,50?mol/L,75?mol/L药物浓度作用48h。通过流式细胞仪检测内皮细胞的凋亡率,观察早期凋亡率及晚期凋亡率。通过Western Blot实验方法检测盐酸小檗碱作用内皮细胞48h后BAX蛋白、BCL-2蛋白、p38MAPK、ERK1/2及p-ERK1/2通路蛋白的表达情况。结果:25?mol/L,50?mol/L,75?mol/L浓度小檗碱作用24h(P0.01),48h(P0.01),72h(P0.01)显著抑制内皮细胞增殖活性。流式散点图可以观察到,随着药物浓度的递增,细胞凋亡率逐渐增加,特别是早期凋亡率。与对照组相比,25?mol/L,50?mol/L,75?mol/L浓度组总凋亡率和早期凋亡率具有显著性差异。75?mol/L盐酸小檗碱作用于内皮细胞的凋亡率可达到14.74%±1.66%(P0.01),主要以早期凋亡率为主,可达到12.99%±1.40%(P0.01);50?mol/L盐酸小檗碱作用于内皮细胞的凋亡率可达到13.18%±0.75%(P0.01),其中早期凋亡率为10.6%±0.62%(P0.01);低浓度组25?mol/L盐酸小檗碱作用于内皮细胞的凋亡率可达到9.93%±3.14%(P0.05),其中早期凋亡率可达到7.81%±2.14%(P0.01)。Western Blot结果显示:与对照组相比,盐酸小檗碱干预组可显著抑制抑凋亡蛋白BCL-2蛋白的表达(P0.05),降低p-ERK1/2与ERK1/2的比值(P0.05);与对照组相比,显著促进75?mol/L组BAX(P0.05)和p38MAPK(P0.05)信号通路蛋白的表达。结论:(1)盐酸小檗碱具有抑制大鼠主动脉内皮细胞增殖,促进内皮细胞凋亡的作用。(2)盐酸小檗碱促进内皮细胞的凋亡可能与BCL-2蛋白的下调,BAX蛋白的上调有关,可能与ERK1/2通路及p38MAPK通路有关。