“川芪方”眼部制剂对实验性视网膜变性的疗效观察

作     者：马纳 

作者单位：中国中医科学院 

学位级别：硕士

导师姓名：李庆生;梁丽娜

授予年度：2014年

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：视网膜变性类疾病 滴眼液 川芪方 碘酸钠 

摘      要：目的： 通过观察“川芪方复方及其有效单体的眼部制剂对大鼠实验性视网膜变性模型的影响,为治疗该类疾病提供新的药物及剂型选择,同时也为今后开发治疗内眼疾病的中药眼局部制剂奠定基础。 方法： 1.制备川芪方眼部制剂：采用水提醇沉方法制备复方浓缩液,按比例配制成水溶液,有效单体选用黄芪甲苷和川芎嗪,按1：1比例配制成水溶液,调整PH值及渗透压。眼部刺激性实验时选用SD大白鼠,予“川芪方复方点眼和有效单体分别点眼,连续给药7d,每天四次,每次20u1,观察动物全身状况。 2.观察“川芪方制剂对碘酸钠(NaI03)诱导的视网膜变性模型的干预作用：以碘酸钠诱导大鼠视网膜变性模型为研究对象,采用视网膜电图、组织病理学等技术观察“川芪方复方眼部给药、有效单体眼部给药对视网膜损伤的治疗作用：采用碘酸钠40mg/kg大鼠注射造模后,将大鼠随机分为复方制剂组、单体制剂组、对照药施图伦组、模型组,分别于用药后7、14天进行视网膜电图测量、RPE铺片、病理学切片及HE染色方法观察视网膜功能及组织病理学变化。 3.采用TUNEL及免疫组化技术观察视网膜细胞凋亡情况及对RPE细胞、感光细胞特异蛋白表达的影响,探讨“川芪方作用机制：造模方法同上,给药后7、14天处死大鼠后迅速摘取眼球,常规冰冻切片,采用免疫组化技术观察视网膜RPE65及视蛋白的表达变化。 结果： 1. NaI03可诱导包括RPE细胞在内的视网膜损伤,具有剂量、时间相关性。 2.从对视网膜功能的影响来看,NaIO3对视杆细胞反应(Rod-ERG)、视锥细胞反应(Cone-ERG)及闪烁光反应(Flicker-ERG)影响比较明显,推测NaI03对RPE及视锥细胞具有选择性的促凋亡作用。 3.从RPE铺片、TUNEL及RPE65蛋白表达的检测来看,NaI03可造成RPE65蛋白表达减少、细胞凋亡增多,对RPE细胞有促凋亡作用,并且具有剂量依赖性。 4.从电生理、视网膜组织病理学、视网膜细胞及RPE65蛋白表达的检测来看,川芪方眼部制剂系列药物可造成RPE65蛋白表达减少、细胞凋亡增多,对RPE细胞有部分保护作用,可以减轻视网膜受损程度。 结论： 1.川芪方复方及有效单体眼部制剂对碘酸钠诱导视网膜变性大鼠模型有一定治疗作用,其中,黄芪甲苷滴眼剂作用最明显,川芪方滴眼液次之。 2.“川芪方复方及其单体的作用机制可能与抗视网膜细胞凋亡有关。 3.本研究结果初步显示“川芪方及其单体的眼部制剂对视网膜变性有保护作用,但其具体作用途径、作用环节仍需从药代动力学、药理学方面深入探讨。