欧洲黑杨N46组培再生过程中基因组DNA甲基化变化

作     者：王颜波 

作者单位：江西农业大学 

学位级别：硕士

导师姓名：王建革;张冰玉

授予年度：2015年

学科分类：0907[农学-林学] 08[工学] 0829[工学-林业工程] 09[农学] 

主      题：欧洲黑杨N46 组培再生体系 干旱胁迫 分化再生 DNA甲基化 

摘      要：DNA甲基化是真核生物中表观遗传的主要形式之一,参与多种生命活动,在各类生物中广泛存在。DNA甲基化易受外界环境条件影响,组织培养过程产生的DNA是再生植株表型变异的一个重要来源。在世界范围内杨树栽培中,欧洲黑杨具有重要地位。本研究以欧洲黑杨N46为材料,利用毛细管电泳的MSAP技术和荧光定量PCR对其在经历干旱胁迫后再生一代和正常条件下的分化再生5代组培苗的基因组DNA甲基化变化进行了研究。取得的结果如下:1、建立了高效稳定的组培再生体系。最佳体系是:欧洲黑杨N46无性系最适的分化培养基为MS+6-BA 0.5 mg·L-1+NAA 0.03 mg·L-1+蔗糖30 g·L-1+0.5%琼脂粉,最佳诱导温度为27℃。最佳的生根培养基为1/2 MS+IBA 0.01 mg·L-1+NAA 0.01mg·L-1+蔗糖30 g·L-1+0.5%琼脂粉,最佳生根温度为25℃。该再生体系为黑杨派树种快速无性繁殖及遗传转化提供了借鉴。2、利用毛细管电泳的MSAP技术研究了欧洲黑杨N46经历干旱胁迫后再生一代和正常条件下组培再生5代的组培苗的叶片基因组DNA甲基化变化,共筛选出的17对选择性扩增引物,均获得了清晰的扩增谱带,每对引物组合扩增片段200条,长度在50到700 bp之间。共扩增出片段725个。3、MSAP结果显示未经分化的欧洲黑杨N46原始组培苗G0的总甲基化水平为23.17%,全甲基化水平为16.52%,半甲基化水平为4.76%。经历干旱胁迫和正常条件下分化再生各代总体甲基化水平分别为22.59%、21.90%、20.86%、22.93%、22.34%、21.72%。多代再生未对欧洲黑杨N46基因组DNA甲基化造成影响。