维生素D及其受体与维生素D代谢酶在强直性脊柱炎患者中的表达及其临床意义

作     者：兰由玉 

作者单位：泸州医学院 

学位级别：硕士

导师姓名：刘毅

授予年度：2010年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100201[医学-内科学(含：心血管病、血液病、呼吸系病、消化系病、内分泌与代谢病、肾病、风湿病、传染病)] 10[医学] 

主      题：维生素D 25-羟基维生素D3 1,25-二羟基维生素D3 维生素D受体 强直性脊柱炎 CYP24A1 CYP27B1 

摘      要：目的：研究强直性脊柱炎患者(ankylosing spondylitis, AS)外周血单核细胞维生素D受体(VDR)与维生素D代谢酶相关基因25-羟基维生素D-24羟化酶(CYP24A1)、25-羟基维生素D-1α-羟化酶(CYP27B1) mRNA的表达以及AS患者血清25-羟基维生素D3(25-(OH)D3/25-D)和1,25-二羟基维生素D3(1,25-(OH)2D3/1,25-D)的水平,探讨其与AS疾病活动性[Bath强直性脊柱炎疾病活动指数(BASDAI)、C-反应蛋白(CRP)、血沉(ESR)]的相关性以及在AS发病中的作用,并为寻找新的治疗靶点提供理论依据。方法：选取26例强直性脊柱炎患者(AS病人组)和年龄、性别与之相匹配的健康正常者13例(正常对照组)。用Ficoll密度梯度离心法分离出外周血单个核细胞后,利用单核细胞贴壁生长的特性分离出外周血单核细胞,然后采用Trizol提取总RNA,并逆转录为cDNA,通过SYBR Green I实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)分析其VDR、CYP24A1、CYP27B1 mRNA的表达水平,实验数据以内参基因β-actin标化,根据相对定量公式：2-△△CT分析VDR、CYP24A1和CYP27B1 mRNA的相对表达水平。同时分析VDR mRNA的表达水平与临床相关指标(BASDAI、CRP、ESR)的相关关系。用酶联免疫吸附试验(ELISA法)检测AS患者和正常对照者血清中25-羟基维生素D3和1,25-二羟基维生素D3的水平,并与疾病活动性指标进行相关性分析。结果：***病人组VDR mRNA的表达明显高于正常对照组,且有显著的统计学差异(P0.05)。*** mRNA的相对表达水平与临床相关指标(BASDAI、CRP、ESR)无相关关系存在(P0.05)。***患者血清25-羟基维生素D3的浓度为(5.27±2.57 ng/ml)明显低于正常对照组(14.73±3.52 ng/ml),差异有统计学意义(P0.01)。AS患者血清1,25-二羟基维生素D3的浓度(12.82±5.99 pg/ml)和正常对照组(32.58±18.46 pg/ml)比较,有显著的统计学差异(P0.01)。***患者血清1,25-二羟基维生素D3的水平与BASDAI呈负相关(r=-0.481,P0.05),与ESR(r=-0.535,P0.01)、CRP(r=-0.674,P0.01)均呈明显负相关。结论：***患者外周血单核细胞有VDR、CYP27B1和CYP24A1的表达,说明肾外组织也有CYP27B1的表达。***患者外周血单核细胞的VDR mRNA的表达增加,可能是机体固有免疫应答增强的原因之一。***的表达增加可能与AS的发生发展有一定的相关性,但与疾病活动性无相关关系。4.血清25-D和1,25-D的水平与AS的疾病活动有关,说明其可能是反映AS疾病活动的指标之一。***的活化可能与其自动调节功能有关,而并不是依赖于1,25-D的,即VDR的活化可能与1,25-D的作用无关。***患者可能是通过VDR的异常活化或维生素D的缺乏来抑制CYP27B1的表达,从而减少了1,25-D的合成。***24A1可能在维持AS患者血清25-D和1,25-D水平的动态平衡方面起了一定的作用。***患者VDR mRNA的表达增加和血清1,25-D的水平降低可能与AS的发病有一定的相关性。