非洲爪蟾眼发育和晶状体再生过程中Pax6基因表达荧光定量PCR和免疫组化分析

作     者：朱利瑞 

作者单位：兰州大学 

学位级别：硕士

导师姓名：高岚

授予年度：2009年

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

主      题：非洲爪蟾 发育 再生 Real-Time PCR 免疫组化 Pax6基因 

摘      要：以无尾两栖类(Anuran)非洲爪蟾(Xenopus Laevis)胚胎及后肢芽期蝌蚪为实验材料,采用实时荧光定量PCR(Real-Time PCR)法,SP免疫组织化学法分别测定非洲爪蟾胚胎期眼睛发育过程中及后肢芽期蝌蚪晶状体再生过程中Pax6的表达。免疫组化结果显示:非洲爪蟾蝌蚪晶状体再生来源于外角膜的内层细胞;与对照组相比,晶状体再生过程中Pax6蛋白在眼睛、角膜及晶状体中的表达有明显的变化;随着晶状体再生,外角膜Pax6蛋白表达由高到低,最后趋于稳定;随着晶状体再生,晶状体内Pax6蛋白由整个晶状体表达,最后仅晶状体上皮表达Pax6蛋白;Pax6蛋白表达免疫组化光密度分析结果显示,晶状体摘除后第1天,Pax6蛋白在外角膜中的表达量即显著升高,Pax6蛋白累积光密度与对照组相比达到极显著水平(P0.01);在晶状体再生过程中Pax6蛋白存在两个明显的表达高峰,晶状体再生第3天、7天。Pax6蛋白累积光密度测量结果显示,晶状体再生第3天累积光密度值是Pax6在眼睛内表达的第一个高峰,与再生第1天、5天相比,达到显著水平(0.01P0.05);再生第7天眼睛内Pax6蛋白表达累积光密度值是Pax6在眼睛内表达的第二个高峰,与再生第5天、9天相比,达到显著水平(0.01P0.05)。荧光定量PCR结果显示:在非洲爪蟾眼睛发育及晶状体再生过程中Pax6基因mRNA分别存在两个明显的表达高峰,它们是胚胎20期、34期,晶状体再生第3天、7天。以上研究结果表明,Pax6基因在非洲爪蟾眼睛发育和晶状体再生过程中发挥晶状体诱导、调控细胞增殖和晶状体纤维分化的作用;为进一步研究脊椎动物眼睛发育及晶状体再生的分子机制奠定了基础。