dsRNA上调Numb基因表达对人前列腺癌PC-3细胞影响的研究

作     者：陈金飚 

作者单位：福建医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：颜醒愚

授予年度：2015年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：小激活RNA Numb 人前列腺癌PC-3细胞 二氢睾酮 氟他胺 

摘      要：目的基于小激活RNA(small activating RNA,sa RNA)的肿瘤治疗策略,为Numb基因筛选出具有激活功能并相对高效的sa RNA分子。继而探讨雄激素及抗雄激素药物对转染Numb-sa RNA的人前列腺癌PC-3细胞生长的影响。方法1.设计与合成针对Numb基因的3对候选小分子双链RNA(double-stranded RNA,ds RNA)分子,对照组ds RNA(ds Control)设计成与人类基因组序列非同源。将ds RNA分子转染人前列腺癌PC-3细胞。2.采用Real-time quantitative PCR(RT-q PCR)法检测转染后人前列腺癌PC-3细胞中靶基因Numb的m RNA表达水平。*** Blot验证转染后人前列腺癌PC-3细胞靶基因Numb的蛋白表达水平。4.将筛选出的Numb-sa RNA转染入人前列腺癌PC-3细胞,实验组分为转染组和非转染组,以未转染以及未行药物处理的细胞作为阴性对照组。分别采用不同浓度的二氢睾酮(dihydrotestosterone,DHT),氟他胺(flutamide)、二氢睾酮-氟他胺混合液(dihydrotestosterone-flutamide mixture,DHT-F)处理实验组细胞,采用MTT法在药物处理48h后分别测定细胞活性;5.根据MTT法检测结果,筛选出有效的药物浓度,分别处理转染组和非转染细胞,培养48h后,采用Annexin V-FITC/PI检测各组细胞的凋亡情况。结果*** Numb-870、ds Numb-948均未能上调人前列腺癌PC-3细胞中靶基因Numb m RNA水平;而ds Numb-298能上调细胞内Numb m RNA和蛋白水平。2.采用MTT法检测细胞增殖情况,DHT处理细胞后,发现转染组在10-3mol/L、10-4mol/L、10-5mol/L三个浓度组的相对存活率均明显低于阴性对照组,差异有统计学意义(P0.05);转染组在10-3mol/L和10-4mol/L浓度组的相对存活率明显低于非转染组,差异有统计学意义(P0.05)。氟他胺处理细胞后,转染组在10-3mol/L、10-4mol/L、10-5mol/L三个浓度组的相对存活率均低于阴性对照组,差异有统计学意义(P0.05);转染组在10-4mol/L浓度组的相对存活率明显低于非转染组,差异有统计学意义(P0.05)。二氢睾酮-氟他胺混合液处理后,转染组各个浓度组的相对存活率较阴性对照组均明显降低,差异有统计学意义(P0.05);且转染组在各个浓度的相对存活率均明显低于非转染组,差异均有统计学意义(P0.05)。3.采用Annexin V-FITC/PI双染法,利用流式细胞技术检测细胞凋亡情况,DHT处理后,转染组的凋亡率较阴性对照组下降,差异有统计学意义(P0.05);转染组的凋亡率较非转染组明显下降,差异有统计学意义(P0.05)。氟他胺处理后,转染组的凋亡率较阴性对照组明显上升,差异有统计学意义(P0.05);转染组较非转染组的凋亡率明显上升,差异有统计学意义(P0.05)。二氢睾酮-氟他胺混合液处理后,转染组的凋亡率较阴性对照组明显上升,差异有统计学意义(P0.05);转染组的凋亡率多于非转染组,差异有统计学意义(P0.05)。结论1.经筛选ds Numb-298具有特异性激活人前列腺癌PC-3细胞中Numb基因表达的功能。2.将Numb-sa RNA转染入人前列腺癌PC-3细胞中,能在一定程度上使人前列腺癌PC-3恢复对激素的敏感性,诱导其凋亡。