鹅等级前卵泡发育研究及GnIH在等级前卵泡中的表达分析

作     者：董霞 

作者单位：四川农业大学 

学位级别：硕士

导师姓名：李亮;王继文

授予年度：2013年

学科分类：0905[农学-畜牧学] 09[农学] 

主      题：鹅 等级前卵泡 卵泡壁 FSHR Caspase-3 GnIH GnIHR 

摘      要：禽类卵泡的生长、发育、排卵、闭锁过程受到下丘脑-垂体-性腺轴(HPG轴)的调控,其分泌的促性腺激素如FSH, LH在禽类繁殖过程中起着关键作用,GnRH,GnIH能直接调控(?)SH、LH的合成与释放,共同维持卵泡生长发育的动态平衡。本实验以处于产蛋高峰期的天府肉鹅等级前卵泡为研究材料,制作石蜡切片进行常规HE染色观测了其形态变化特征,同时采用Real time PCR法检测鹅等级前卵泡FSHR基因]mRNA表达丰度,采用ELISA法检测卵泡颗粒层Caspase-3酶活性变化,并通过克隆鹅GnIH, GnIHR编码区序列,检测了两者在等级前卵泡中的相对表达量,初步探讨了GnIH在等级前卵泡中的作用。主要研究结果如下： (1)随着鹅卵泡发育,卵泡壁的颗粒层、膜层厚度和细胞层数发生明显变化,其中颗粒层厚度变化最显著,呈现先增加后减少的总趋势,6-7mm时达到最厚,9～10mm降为时最薄;膜层厚度呈现较平缓的增加趋势,8～9mm时最厚,但是9～10mm却降为时最薄。 (2) FSHR的表达量随着卵泡的发育呈现先增高后降低的总趋势,首先持续增加至直径3-4mm的卵泡,从直径4～5mm的卵泡开始缓慢降低,到直径9～10mm时降为最低,但是直径8～9mm的卵泡中,其表达量最高。 (3)等级前卵泡的颗粒层细胞中,Caspase-3酶活性均较低,仅在直径6-8mm卵泡中酶活性相对较高。 (4) TUNEL免疫染色法对鹅卵泡细胞凋亡情况的检测结果表明,闭锁卵泡中呈现TUNEL阳性的细胞较多,直径8-10mm的等级前卵泡中较少,排卵前卵泡(F5)几乎没有细胞凋亡 (5)本试验首次扩增了鹅GnIH, GnIHR CDS区的部分序列,分别长471bp和1086bp,各编码氨基酸157个和362个。不同物种间相似性比对结果表明,两个基因在物种间高度保守。 (6)GnIH在等级前卵泡中均有表达,在直径4-5mm卵泡中表达量最高,随着卵泡发育接近等级排列其表达量降低。GnIHR在等级前卵泡均有表达,在直径3～4mm卵泡中表达量最高,随着卵泡发育接近等级排列其表达量降低。