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gnih对卵巢摘除术后补充雌激素大鼠下丘脑POMC阳性神经元的影响

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神经解剖学杂志 2019年第1期35卷 57-63页

作者：陈磊司丽娜魏萌郭森杨松鹤陈志宏程露阳乔跃兵承德医学院承德067000 沧州医学高等专科学校沧州061001

目的:探讨促性腺激素抑制激素(Gn IH/RFRP-3)对卵巢摘除术补充雌激素(OEP)大鼠下丘脑阿片-促黑素细胞皮质素原(POMC)阳性神经元的影响。方法:65只成年雌性SD大鼠,随机选取2只用于免疫荧光多重染色,观察Gn IH/RFRP-3与POMC在大鼠下丘脑... 详细信息

目的:探讨促性腺激素抑制激素(Gn IH/RFRP-3)对卵巢摘除术补充雌激素(OEP)大鼠下丘脑阿片-促黑素细胞皮质素原(POMC)阳性神经元的影响。方法:65只成年雌性SD大鼠,随机选取2只用于免疫荧光多重染色,观察Gn IH/RFRP-3与POMC在大鼠下丘脑神经元的表达;随机选取3只用于免疫共沉淀(Co-IP)实验,检测Gn IH/RFRP-3与POMC的相互作用;余下60只建立卵巢摘除术补充雌激素(OEP)大鼠模型,模型组随机分成注射Gn IH实验组和生理盐水对照组,每组30只,每组根据注射时间不同分为20、40、60、120、240、360min等共6个亚组,每组5只,采用Western Blot法检测Gn IH/RFRP-3处理对下丘脑POMC表达的影响。结果:免疫荧光多重标记结果显示,Gn IH/RFRP-3与POMC共表达于大鼠下丘脑神经元; Co-IP结果证明,Gn IH/RFRP-3与POMC存在相互作用; Western Blot结果表明,注射Gn IH/RFRP-3后20 min组大鼠下丘脑POMC蛋白表达量显著高于对照组(P <0. 05),注射60、120、240、360 min实验组大鼠POMC蛋白表达量明显低于对照组(P <0. 05)。与20 min实验组相比,60、120、240 min组蛋白表达量依次呈下降趋势,360 min组蛋白表达量有升高趋势但是仍然低于20 min组(P <0. 05)。结论:Gn IH/RFRP-3可直接作用于POMC神经元。

关键词：下丘脑 gnih POMC 卵巢摘除大鼠

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gnih对母猪生殖调控的研究

中国农业科学 2014年第18期47卷 3716-3724页

作者：汪瑶李珣李敏婕国梦婕雷治海南京农业大学动物医学院广西大学动物科学与技术学院

【目的】研究促性腺激素抑制激素(gnih)mRNA在母猪组织器官中的分布,不同剂量gnih对母猪卵巢类固醇激素合成和细胞增殖相关蛋白表达的影响,及GPR147与GnRH的形态学关系。从分子、细胞水平和形态学角度,探讨gnih在下丘脑-垂体-性腺轴对... 详细信息

【目的】研究促性腺激素抑制激素(gnih)mRNA在母猪组织器官中的分布,不同剂量gnih对母猪卵巢类固醇激素合成和细胞增殖相关蛋白表达的影响,及GPR147与GnRH的形态学关系。从分子、细胞水平和形态学角度,探讨gnih在下丘脑-垂体-性腺轴对母猪生殖调控的作用机制,丰富神经内分泌学的内容。【方法】以30日龄健康仔母猪为研究对象,采用半定量RT-PCR方法研究gnih mRNA在母猪24个组织中的分布定位。采集青年母猪卵巢样品,分离卵巢颗粒细胞,研究不同剂量gnih(10-6、10-8、10-10和10-12 mol·L-1)对体外培养的母猪卵巢颗粒细胞类固醇激素(雌二醇,孕酮)的合成、细胞增殖相关蛋白(cyclin B1,PCNA)表达的影响。取30日龄健康仔母猪下丘脑,制作脑片,采用荧光双标记,激光共聚焦显微镜观察拍照分析GPR147与GnRH的形态学关系。【结果】gnih mRNA主要在母猪的中枢神经系统中表达,尤其是在间脑表达含量最高。在外周组织,如子宫、卵巢、垂体中也有一定量表达。不同剂量的gnih作用于体外培养的卵巢颗粒细胞,其中10-6和10-10 mol·L-1 gnih能极显著地抑制雌二醇的分泌(Pgnih对孕酮分泌的影响并不显著。gnih能极显著地抑制卵巢增殖相关蛋白PCNA和cyclin B1的表达(Pgnih可在下丘脑水平通过其受体直接作用于GnRH神经元,影响GnRH的合成和分泌,进而在中枢水平调控母猪的生殖活动。在外周生殖器官中,gnih可通过影响卵巢激素的分泌和细胞增殖相关蛋白的表达参与母猪的生殖调控。

关键词：母猪 gnih 半定量RT-PCR 生殖调控

gnih在陆川仔公猪中枢神经系统的分布与定位

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中国兽医科学 2015年第10期45卷 1072-1077页

作者：霍孔林胡浩李建华罗波王晓晔李珣广西大学动物科学技术学院广西南宁530004

以30日龄健康陆川仔公猪为研究对象,采用免疫组织化学方法及半定量RT-PCR对中枢神经系统的gnih进行观察定位,从形态学角度及分子水平为深入研究gnih的生理功能奠定理论基础。免疫组织化学结果表明,在陆川猪中枢神经系统中,大脑皮质、小... 详细信息

以30日龄健康陆川仔公猪为研究对象,采用免疫组织化学方法及半定量RT-PCR对中枢神经系统的gnih进行观察定位,从形态学角度及分子水平为深入研究gnih的生理功能奠定理论基础。免疫组织化学结果表明,在陆川猪中枢神经系统中,大脑皮质、小脑、海马、嗅球、脑桥、中脑、延髓和脊髓均有gnih免疫阳性神经元分布,但胞体形态多样,大小不一。半定量RT-PCR结果显示,gnih mRNA在延髓表达量最高,其次为中脑,嗅球最低,其余为中等表达。gnih免疫阳性神经元及其纤维在中枢神经系统的分布情况与gnih mRNA的表达分布一致,进一步印证了gnih在陆川公猪中枢神经系统的广泛分布。

关键词：陆川仔猪 gnih 免疫组织化学半定量RT-PCR

gnih基因克隆、表达及对幼龄公兔生殖激素的影响

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畜牧兽医学报 2023年第1期54卷 201-212页

作者：桑雷陈冬金孙世坤高承芳王锦祥陈岩锋谢喜平福建省农业科学院畜牧兽医研究所福州350013 福建省畜禽遗传育种重点实验室福州350013

旨在获得兔促性腺激素抑制素(gonadotropin-inhibitory hormone,gnih)基因,检测其在不同组织和不同发育阶段下丘脑中的表达水平,研究其对幼龄公兔生殖激素分泌的影响。本研究以90日龄健康闽西南黑兔公兔为研究对象,采用RACE技术(rapid-a... 详细信息

旨在获得兔促性腺激素抑制素(gonadotropin-inhibitory hormone,gnih)基因,检测其在不同组织和不同发育阶段下丘脑中的表达水平,研究其对幼龄公兔生殖激素分泌的影响。本研究以90日龄健康闽西南黑兔公兔为研究对象,采用RACE技术(rapid-amplification of cDNA ends)从下丘脑组织中克隆出gnih基因,并对序列进行生物信息学分析;采用实时荧光定量PCR方法(real-time quantitative PCR,qPCR)检测gnih基因mRNA在90日龄公兔不同组织表达水平(n=5)及11、30、60、90、120、150日龄公兔下丘脑中的表达水平(n=6);连续10 d向80日龄公兔分别注射0、0.5、5和50μg鹌鹑gnih相关肽(n=10)。第11天早上采集耳静脉血液后,屠宰公兔,采集睾丸组织,分别检测血清中生殖激素浓度(GnRH、FSH、LH、INHB和T)和睾丸组织中睾酮合成相关酶基因(StarR、3β-HSD和p450scc)mRNA的表达水平。结果表明,兔gnih基因cDNA全长904 bp,包含5′UTR 41 bp, CDS区606 bp, 3′UTR 227 bp,编码201个氨基酸。该基因在90日龄公兔大部分组织中均有表达,其中在下丘脑中表达最高(Pgnih后,50μg剂量组幼龄公兔的血清睾酮浓度极显著低于对照组和0.5μg剂量组(P0.05)。结果提示,gnih基因可能与LH和睾酮的分泌与合成有关,并参与公兔的生殖发育调控,长期注射高剂量gnih相关肽会导致公兔对药物不敏感,其具体调控机制还需后续研究。

关键词： gnih 闽西南黑兔基因克隆基因表达生殖激素

不同浓度gnih对鸭颗粒细胞周期和增殖的影响

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畜牧兽医学报 2021年第1期52卷 116-125页

作者：陈世健刘文俊杨晨江丹莉欧阳宏佳黄运茂田允波仲恺农业工程学院广州510225 广东省水禽健康养殖重点实验室广州510225

为了研究不同浓度gnih对鸭颗粒细胞周期、增殖及相关基因表达的影响。本研究分别用不同浓度gnih(0、0.1、1、10和100 ng·mL~(-1))处理体外培养的鸭颗粒细胞24 h(n=3),观察细胞的生长状态,通过流式细胞术和EdU方法检测细胞周期和细胞增... 详细信息

为了研究不同浓度gnih对鸭颗粒细胞周期、增殖及相关基因表达的影响。本研究分别用不同浓度gnih(0、0.1、1、10和100 ng·mL~(-1))处理体外培养的鸭颗粒细胞24 h(n=3),观察细胞的生长状态,通过流式细胞术和EdU方法检测细胞周期和细胞增殖,并用qRT-PCR方法检测增殖相关基因CDK6、CyclinD1、IGF-2、IGFBP-2、p27~(kip1)的表达。结果显示,各浓度gnih处理组的细胞生长状态良好,形态正常,细胞轮廓清晰,组间死亡细胞数差异不显著(P>0.05);在0.1和1 ng·mL~(-1) gnih处理组,细胞周期阻滞在G2期的比例显著上升(Pgnih处理浓度的增加,EdU阳性细胞数所占的百分比降低;在0.1和1 ng·mL~(-1) gnih处理组,颗粒细胞中CDK6、CyclinD1、IGF-2、IGFBP-2、p27~(kip1)基因的相对表达量均下降,在10和100 ng·mL~(-1) gnih处理组中这些基因的相对表达量则有所上升。研究表明,在体外培养的鸭颗粒细胞中,gnih能使细胞周期阻滞在G2期,并降低EdU阳性细胞所占百分比和下调增殖相关基因的表达水平,从而抑制颗粒细胞增殖来影响动物繁殖性能。

关键词： gnih 颗粒细胞细胞周期细胞增殖鸭

Distribution and Localization of Gonadotropin-inhibitory Hormone( gnih ) in the Central Nervous System of Male Luchuan Piglets

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Animal Husbandry and Feed Science 2016年第2期8卷 63-67,78页

作者： Huo Konglin Hu Hao Li Jianhua Luo Bo Wang Xiaoye Li Xun College of Animal Science and Technology Guangxi University

Immunohistochemistry （IHC） and semi-quantitative RT-PCR were used to detect the distribution of gnih in the central nervous system of 30-day-old male Luchuan piglets, which laid a theoretical basis for in-depth research on physiological functions of Gn[H from the perspective of morphology and molecular lev- el. IHC results showed that in central nervous system, gnih immunoreactive neurons distributed in cerebral cortex, cerebellum, hippocampus, olfactory bulb, ports, midbrain, medulla oblongata and spinal cord of Luchuan piglets, but gnih-immunoreactive （gnih-ir） cell bodies employed diversified morphologies with va- rying sizes. The results of semi-quantitative RT-PCR showed that the expression of gnih mRNA in medulla obhingata was the highest, followed by midbrain, and the expression of gnih mRNA in olfactory bulb was the lowest, while those in other tissues were medium. The results of IHC and semi-quantitative RT-PCR were coincident, which further confirmed wide distribution of gnih in the central nervous system of male Luchuan piglets.

关键词： Luchuan piglet gnih Immunohistochemistry Semi-quantitative RT-PCR

gnih过表达载体构建及其对小鼠睾丸间质细胞的作用研究

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畜牧兽医学报 2021年第10期52卷 2969-2977页

作者：汤亚茹阳美霞贾金美张虹亮王水莲湖南农业大学动物医学院长沙410128

本试验通过构建gnih过表达载体,探究其对小鼠睾丸间质细胞(TM3细胞系)的凋亡效应及睾酮合成的调节作用。从6~8周雄性小鼠睾丸组织中提取RNA,反转录获得cDNA样本,利用PCR扩增并纯化gnih基因,应用T4连接酶将其连入PLVX-IRES-ZsGreen1载体... 详细信息

本试验通过构建gnih过表达载体,探究其对小鼠睾丸间质细胞(TM3细胞系)的凋亡效应及睾酮合成的调节作用。从6~8周雄性小鼠睾丸组织中提取RNA,反转录获得cDNA样本,利用PCR扩增并纯化gnih基因,应用T4连接酶将其连入PLVX-IRES-ZsGreen1载体,进一步转化到感受态菌中,通过PCR、双酶切及测序鉴定后提取质粒。随后将构建好的重组质粒转染TM3细胞系72 h,分为空质粒组和gnih过表达组,通过显微镜观察细胞荧光、实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法、ELISA法和流式细胞术检测gnih表达水平、细胞凋亡率及相关凋亡基因表达变化、睾酮分泌水平和睾酮合成酶基因表达水平。结果显示,gnih扩增片段序列与参考序列一致,将gnih过表达质粒转染至TM3细胞系72 h后,可见高强度绿色荧光,过表达组中gnih基因水平极显著升高(Pgnih过表达载体构建成功且在TM3细胞系中高表达。转染72 h后,与空质粒组相比,过表达组中细胞凋亡率极显著升高(P0.05)。综上所述,在体外培养的TM3细胞中过表达gnih能诱导TM3细胞凋亡、抑制睾酮分泌且降低睾酮合成相关酶的基因表达水平,推断gnih在小鼠睾丸间质细胞生长和睾酮合成过程中发挥负调控作用。本研究可为揭示gnih在雄性哺乳动物生殖调控过程中的作用提供科学理论依据。

关键词： gnih 载体构建间质细胞细胞凋亡睾酮睾酮合成酶

gnih在陆川仔公猪泌尿生殖系统及内分泌免疫系统中的分布

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西北农林科技大学学报（自然科学版） 2016年第12期44卷 16-20页

作者：霍孔林李昀王晓晔胡浩李建华李珣广西大学动物科学技术学院广西南宁530004 广西理工科学实验中心广西南宁530004

【目的】从形态学水平和分子水平探究促性腺激素抑制激素(gnih)在陆川仔公猪泌尿生殖系统和内分泌免疫系统中的分布情况。【方法】采集30日龄健康陆川仔公猪的睾丸、附睾、附睾管、肾、肾上腺、甲状腺、腭扁桃体、脾、淋巴结、胸腺,采... 详细信息

【目的】从形态学水平和分子水平探究促性腺激素抑制激素(gnih)在陆川仔公猪泌尿生殖系统和内分泌免疫系统中的分布情况。【方法】采集30日龄健康陆川仔公猪的睾丸、附睾、附睾管、肾、肾上腺、甲状腺、腭扁桃体、脾、淋巴结、胸腺,采用免疫组织化学和半定量RT-PCR的方法检测gnih在其泌尿生殖系统和内分泌免疫系统的分布情况。【结果】免疫组织化学分析结果显示,在睾丸、附睾、附睾管、肾、肾上腺、甲状腺、腭扁桃体、脾、淋巴结、胸腺均有不同数量的gnih免疫阳性细胞分布。半定量RT-PCR的检测显示,gnih mRNA除了在甲状腺、脾和淋巴结无表达外,在其余组织均有不同程度的表达。【结论】gnih在泌尿生殖系统和内分泌免疫系统分布广泛,提示gnih在生殖、免疫和内分泌等生理过程中可能有重要作用。

关键词： gnih 陆川仔公猪免疫组织化学半定量RT-PCR

脂联素及其受体与GnRH和gnih在皖南花猪下丘脑中的发育性表达及相关性研究

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西北农林科技大学学报（自然科学版） 2013年第12期41卷 7-13页

作者：李云张凌齐周杰田磊磊李维新刘力源张淑静安徽农业大学动物科技学院安徽合肥230036

【目的】探讨不同发育时期皖南花猪下丘脑脂联素受体及生殖相关激素表达的发育性变化及其相关性。【方法】选择0,30,45,90,180日龄皖南花猪公、母猪各5头,采集其血清和下丘脑组织,采用ELISA法检测各日龄猪血清中脂联素(Adp)质量浓度和... 详细信息

【目的】探讨不同发育时期皖南花猪下丘脑脂联素受体及生殖相关激素表达的发育性变化及其相关性。【方法】选择0,30,45,90,180日龄皖南花猪公、母猪各5头,采集其血清和下丘脑组织,采用ELISA法检测各日龄猪血清中脂联素(Adp)质量浓度和促性腺激素释放激素(GnRH)、促性腺激素抑制激素(gnih)的活性,用实时荧光定量PCR方法检测猪下丘脑中Adp、脂联素受体1(AdpR1)、2(AdpR2)及GnRH、gnih mRNA表达量的发育性变化和性别差异。【结果】不同日龄皖南花猪血清Adp与GnRH、gnih水平均有极显著的发育性变化,其中30日龄猪的脂联素极显著低于其他日龄(Pgnih水平极显著高于其他日龄(P0.05),AdpR1mRNA表达量在各个日龄均显著高于AdpR2mRNA。下丘脑GnRH、gnih mRNA的发育性变化总体呈下降趋势,刚出生母猪的下丘脑GnRH mRNA表达量显著高于其他日龄(Pgnih含量均极显著相关(P<0.01)。【结论】在皖南花猪发育过程中,脂联素对下丘脑的调节可能主要通过内分泌方式发挥作用,并由AdpR1介导抑制GnRH的分泌,且抑制作用主要表现在母猪中。

关键词：皖南花猪脂联素下丘脑 GnRH gnih