异叶败酱提取物DI对胃癌细胞的抑制作用及机制研究

作     者：张丹 

作者单位：浙江中医药大学 

学位级别：硕士

导师姓名：林能明

授予年度：2015年

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：胃癌 DI 细胞增殖 细胞周期 凋亡 

摘      要：目的：异叶败酱是一种传统的中药,其根和根茎富含挥发油,具有一定的药用价值,民间用于治疗子宫癌和宫颈癌。我们的前期研究通过对异叶败酱有效成分的分离提取,得到了一种具有抗肿瘤活性的化合物单体Deacetyl isovaltratum (DI)。本研究旨在探讨DI对人胃癌细胞AGS和HGC-27的作用,并对其可能的机制进行初步探讨,为抗肿瘤候选药物的筛选和研究提供实验基础和开发方向。 方法：采用MTT法检测DI对不同类型的肿瘤细胞的增殖抑制作用,同时进行集落形成实验检测细胞增殖变化;采用流式细胞技术检测DI作用后细胞周期变化以及细胞凋亡率;采用Hoechst33258荧光染色法观察DI作用后细胞的凋亡情况;采用JC-1染色法检测细胞线粒体膜电位的变化;采用Western blot法检测相关蛋白的表达;以及采用Tubulin聚合实验观察细胞微管的变化。 结果：DI能抑制多种实体瘤细胞的增殖,对胃癌细胞AGS和HGC-27在72h的IC50分别为5.78±0.12μM和14.07±0.55μM。随着浓度的增加也能抑制AGS和HGC-27细胞的集落形成;流式细胞技术结果表明DI能引起人胃癌细胞AGS和HGC-27的G2/M期阻滞,而Tubulin聚合实验结果显示DI能促进细胞微管聚合,抑制有丝分裂,使细胞阻滞在M期;Western blot结果显示,一定浓度的DI作用不同时间后,AGS和HGC-27的p-Chkl蛋白表达量上升,而cdc25c和cdc2蛋白表达则逐渐下调。DI还能通过改变线粒体膜通透性,激活caspase3,引起PARP的切割,最终诱导AGS和HGC-27细胞凋亡。 结论：DI可能通过调控Chkl-cdc25c-cdc2通路,促进微管聚合抑制解聚,抑制细胞有丝分裂,引起细胞周期阻滞,从而诱导人胃癌细胞株AGS和HGC-27凋亡。