连作大豆土壤优势AM真菌与根腐病病原菌关系研究

作     者：于文杰 

作者单位：黑龙江大学 

学位级别：硕士

导师姓名：蔡柏岩

授予年度：2013年

学科分类：09[农学] 0904[农学-植物保护] 090401[农学-植物病理学] 090402[农学-农业昆虫与害虫防治] 

主      题：连作大豆 摩西柄囊霉(F.mosseae) 尖孢镰刀菌(F.oxysporum) 实时荧光定量PCR 拮抗 

摘      要：本项研究拟将黑龙江省推广面积较大并具有代表性的3个大豆品种垦丰16(KF16)、黑农44(HN44)、黑农48(HN48)种植于灭菌的连作大豆土壤中,接种筛选出的连作大豆土壤优势AM真菌摩西柄囊霉(Funneliyformis mosseae)又名摩西球囊霉(*** mosseae)和大豆根腐病主要病原菌尖孢镰刀菌(Fuwsarium oxysporum),以不接种摩西柄囊霉(jpmosseae)为对照。采用实时荧光定量PCR技术扩增检测大豆根系和根际土壤中摩西柄囊霉(Fmosseae)、尖孢镰刀菌(Eoxysporum)rDNA特异性序列,通过定量分析DNA含量,确定连作大豆土壤优势AM真菌摩西柄囊霉(Emosseae)与大豆根腐病主要病原菌尖孢镰刀菌(Foxysporum)的关系,从而揭示AM真菌对连作大豆土壤中根腐病病原菌的影响,旨在阐明AM真菌对连作大豆根腐病的抑制机理,为解决大豆连作问题提供理论依据。1.以高粱作为三级培养基活化Foxysporum制备菌剂,结果菌剂浓度达到1.0x107cfu/ml,并可成功有效的侵染大豆根系及根际土壤。2.检测Fmosseae与Foxysporum对不同品种大豆植株各生育期内根系的侵染情况。提取不同大豆品种不同处理间的大豆根系及根际土壤全基因组DNA,PCR扩增检测Fmosseae与Foxysporum对大豆植株各生育期根系的侵染情况。结果表明:不同品种及同一品种不同时期的大豆根系及根际土壤中Fmosseae及Foxysporum均有侵染。3.实时荧光定量PCR.检测同一大豆品种、不同处理间FoxysporumDNA含量变化,结果表明:无论是根系还是根际土壤中KF16、HN44、HN48三个大豆品种接种Emosseae处理后Foxyspoum DNA含量均值均显著低于处理前,即Emosseae对Foxysporum有强烈的拮抗作用。4.实时荧光定量PCR检测同一大豆品种、不同时期FoxysporumDNA含量变化,结果表明无论是根系还是根际土壤,无论是接种Foxysporum处理还是接种Emosseae与Foxysporum共同处理的样品,分枝期时Eoxysporum DNA含量显著高于苗期。5.实时荧光定量PCR检测不同大豆品种、不同处理间FowtyspoumDNA含量变化。结果表明:无论是苗期还是分枝期,无论是根系还是根际土壤,不同品种大豆处理组Foxyspornm DNA含量均值均显著低于对照组。无论是苗期还是分枝期,无论是根系还是根际土壤,不同处理间三个品种大豆 EoxysporwumDNA含量均值不全相同,即三个品种大豆根系及根际土壤中Eoxysporum侵染程度存在差异。KF16表现的尤为突出,FHN44次之。6.实时荧光定量PCR检测同一大豆品种、不同时期Fmosseae DNA含量变化,结果表明:无论是根系还是根际土壤中,分枝期FmosseaeDNA含量显著高于苗期。***和只Eoxysporum的关系经检测Emosseae和Eoxysporum对不同品种大豆植株各生育期根系的侵染情况和实时荧光定量PCR结果:同一品种不同处理间FoxysporumDNA含量变化、同一品种不同时期Eoxysporum DNA含量变化、不同品种不同处理间Foxysporum DNA含量变化及同一品种不同时期Emosseae DNA含量变化结果,证实接种Emosseae和不接种Emoseae处理的大豆根系及根际土壤样品中EoxysporumDNA含量变化存在显著差异,即Fmosseae对Foxysporum有强烈的拮抗作用。