miRNA-34a促进宫颈癌细胞的活性，抑制其迁移、侵袭能力

作     者：马雨薇 

作者单位：天津医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：汤华

授予年度：2015年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：miRNA-34a RIG-I 宫颈癌 迁移 侵袭 

摘      要：【研究背景】微小RNA(micro RNA,mi RNA)是非编码的RNA的一个重要成员,是近年来在转录后调控领域发现的一种生物大分子,它是高度保守的小非编码RNA分子,对许多生理病理过程,例如发育、增殖、分化、凋亡、转移等,产生深远的影响。据研究,人类mi RNAs的表达变化可能会改变自身的身体机能,甚至会导致癌症的发生。mi RNA-34a是一个著名的mi RNA,之前已经报道了许多关于其对于癌症发生发展的关系。但是关于mi RNA-34a与宫颈癌的关系,我们却知之甚少。本论文研究的目的是探讨mi RNA-34a是否对宫颈癌的发生发展产生影响,以及这种影响是通过哪些靶基因实现的。【方法】应用实时定量PCR技术来检测人类宫颈癌组织中及癌旁的组织标本中mi RN A-34a的表达水平。通过构建mi RNA-34a的过表达质粒和敲降质粒,改变了mi RNA-34a在He La细胞中的表达水平,选用MTT实验分析mi RNA-34a对He La细胞活性究竟产生了那些影响,克隆形成实验检测mi RN A-34a对集落形成能力的影响,以及Transwell迁移和侵袭实验检测mi R-34对He La细胞迁移、侵袭能力的影响。利用生物信息学方法预测并挑选出来RIG-I为mi RNA-34a的候选靶基因,并分别采用Western blot和实时定量PCR实验分别从m RNA和蛋白质水平确定mi RNA-34a对RIG-1的调控关系,荧光报告载体实验进一步确定了mi RN A-34a通过结合RIG-1 m RNA的3’UTR区域实现对目标的靶定和调控。在He La细胞中过表达和敲降RIG-1,经过一系列表型实验检测了RIG-1对He La细胞活性、集落形成能力、细胞迁移和侵袭能力的影响。最后通过以上表型实验的挽救实验,确定了mi RNA-34a对He La细胞活性、集落形成能力、细胞迁移和侵袭能力的影响是通过调控RIG-1发挥的。为了分析mi RNA-34a对其靶基因RIG-I调控的具体机制,我们利用FACS分别检测mi RNA-34a及其靶基因RIG-I对于He La细胞凋亡的影响。使用Western blot和荧光报告载体实验检测其对于其自噬水平的影响。利用Western blot检测其对其EMT过程的影响。【结果】mi RNA-34a能促进He La细胞细胞活性、集落形成能力,但是抑制其迁移和侵袭能力;而敲降mi RNA-34a抑制He La的细胞活性、集落形成能力,促进其迁移和侵袭能力。过表达RIG-1则表现为促进He La细胞细胞活性、集落形成能力,抑制其迁移及侵袭能力;而降低其则抑制细胞活性、集落形成能力,促进迁移和侵袭。荧光报告载体实验、实时定量PCR和Western blot都证实,mi RN A-34a直接靶定RIG-I 3’非翻译区的特定位点,对其进行正调节。机制研究显示,过表达mi RNA-34a及其靶基因RIG-I能够抑制细胞凋亡、自噬和EMT的过程。封闭mi RNA-34a及其靶基因RIG-I则产生相反的影响。【结论】mi RNA-34a通过正调控靶基因RIG-1促进He La细胞的细胞活性、集落形成能力,但抑制其迁移和侵袭的能力。抑制凋亡、自噬、EMT过程等作用机制也解释了这一点。