山楂皮花色苷提取物的制备及其生物活性研究

作     者：吴盼盼 

作者单位：安徽中医药大学 

学位级别：硕士

导师姓名：杨滨

授予年度：2017年

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：山楂 矢车菊素-3-O-半乳糖苷 花色苷提取物 工艺优化 化学成分 生物活性 

摘      要：花色苷(Anthocyanin)是一类天然水溶性植物色素,属于黄酮类化合物,广泛存在于自然界植物的多种器官中。近年来的实验研究表明,花色苷具有多种生理活性,在医药领域具有较广阔的应用前景。本研究以蔷薇科植物山里红Crataegus pinnatifida *** ***.的成熟果皮为研究对象,提取分离了矢车菊素-3-O-半乳糖苷化合物,制备了山楂皮花色苷提取物,并对其生物活性进行了研究。具体内容如下:1.山楂皮中矢车菊素-3-O-半乳糖苷的分离纯化采用大孔树脂和聚酰胺树脂柱层析法结合高速逆流色谱法(High-speed countercurrent chromatography,HSCCC)对山楂皮中矢车菊素-3-O-半乳糖苷成分进行分离纯化,以核磁共振氢谱(Proton nuclear magnetic resonance,1H-NMR)对所得样品的结构进行了确认。2.山楂皮花色苷提取物的制备采用单因素法,以矢车菊素-3-O-半乳糖苷和矢车菊素-3-O-阿拉伯糖苷的含量为考察指标,考察了提取方法、提取溶剂的种类、pH值、料液比、提取时间和提取温度对山楂皮花色苷提取效果的影响,得到了山楂皮花色苷提取物的最佳提取条件为料液比1:20,60%酸乙醇(三氟乙酸(TFA),pH 2),超声提取10min(30℃,80 Hz)。在此基础上,考察了山楂皮花色苷提取物纯化的最佳工艺条件。通过静态吸附和静态解吸实验,从6种不同型号大孔树脂中筛选出Diaion HP-20型大孔树脂,考察了上样液浓度及pH值、上样量、洗脱剂浓度及pH值、洗脱量、流速等,确定了纯化条件:HP-20大孔树脂,上样液浓度为200 mg/mL(生药浓度)(TFA,pH 2),最大上样量为6 BV,吸附流速为1 BV/h;以40%酸乙醇(TFA,pH 2)为洗脱液,洗脱液用量为5 BV,洗脱流速为3 BV/h。3.山楂皮花色苷提取物的定性定量分析采用液相色谱法(HPLC)和液质技术对山楂皮花色苷提取物中的化学成分进行了定性定量分析,提取物中可检出矢车菊素-3-O-半乳糖苷、矢车菊素-3-O-阿拉伯糖苷、原花青素B2、金丝桃苷、异槲皮素、原花青素C1、(-)-表儿茶素、绿原酸8种成分,其中矢车菊素-3-O-半乳糖苷、矢车菊素-3-O-阿拉伯糖苷、金丝桃苷、异槲皮素、(-)-表儿茶素、绿原酸6个成分的质量分数为:14.07%、0.25%、0.17%、0.02%、5.11%、1.05%。较山楂皮中上述成分的含量而言,不仅花色苷成分的含量升高,其他黄酮类成分含量也有所提高,可见大孔树脂对山楂皮中的黄酮类成分起到了很好的富集作用。4.山楂皮花色苷提取物生物活性的研究以DPPH法和ORAC法对山楂皮花色苷提取物的抗氧化活性进行评价,实验结果表明,山楂皮花色苷提取物有较强的抗氧化活性,清除DPPH自由基的IC50值为5.79μg/mL,ORAC值为12.14±0.96μmol/mg。使用改良的Ellman法,测定了山楂皮花色苷提取物的抗乙酰胆碱酯酶活性,实验表明山楂皮花色苷提取物有较强的抗乙酰胆碱酯酶活性,IC50值为6.99μg/mL。综上,本文首次使用大孔树脂和HSCCC联用法,对山楂皮中的矢车菊素-3-O-半乳糖苷进行了分离纯化;采用大孔树脂技术制备了山楂皮花色苷提取物,并对其化学成分进行了定性定量分析,同时考察了山楂皮花色苷提取物的生物活性,为山楂的开发利用提供了实验数据。