HIV感染过程中DNT细胞的动态变化研究

作     者：梁骑 

作者单位：川北医学院 

学位级别：硕士

导师姓名：唐中

授予年度：2013年

学科分类：1004[医学-公共卫生与预防医学(可授医学、理学学位)] 100401[医学-流行病与卫生统计学] 10[医学] 

主      题：HIV-1感染 艾滋病 DNT细胞 病毒载量 

摘      要：背景：艾滋病是世界上最严重的传染病之一，已成为全球极大的经济负担和严重的社会问题。HIV难以控制的原因之一为其直接破坏人体免疫系统，使免疫系统不能有效抵抗及清除病毒感染。在HIV与人体免疫系统的复杂作用中寻求突破，已成为国际艾滋病研究的热点问题。CD4细胞的大量丢失，是HIV感染发病机制的主要原因之一，使得机体免疫系统不具有足够数量的辅助性T细胞去抵抗机会性感染和肿瘤的发生。HIV感染的第二个免疫发病机制是过度的免疫活化，实际上大量研究表明调节性T细胞(CD4+CD25+Foxp3+T细胞,Treg细胞)，它能够抑制过度的免疫活化，对机体发挥有利的作用，但是最新研究还表明在HIV感染中Treg细胞本身就要被HIV-1病毒感染和杀伤，因为Treg细胞也表达CD4+分子，它是HIV-1的潜在易感细胞，因此寻找到一种既不表达CD4分子，又具有调节性T细胞和辅助性T细胞的功能，还能补偿低水平的CD4+细胞的细胞亚群，将为艾滋病的预防与治疗提供新的思路，DNT细胞就是这样的一群细胞，它不表达CD4分子也不表达CD8分子，被称为双阴性T细胞(αβ-TCRCD3CD4CD8T细胞)，它具有调节性T细胞的功能已经在自身免疫和移植的小鼠模型中得到了证实，最近一项研究表明SIV感染白眉猴后，DNT细胞能够补偿CD4辅助性T细胞，使得感染SIV的白眉猴保持10年不发病。但到目前为止DNT细胞在HIV感染中作用机制尚不清楚。目前尚无中国HIV感染者DNT细胞作用及机制研究，本研究首次对中国不同疾病进展阶段HIV感染者DNT细胞与CD4计数、病毒载量的相关性研究，初步探讨DNT细胞与HIV感染疾病进展的关系。 目的： (1)探讨HIV感染后疾病进展明显不同的两组病人DNT细胞动态变化情况。 (2)分析DNT细胞与CD4细胞计数变化的关系。 (3)探讨DNT细胞与血浆HIV RNA载量(VL)之间的关系。 (4)分析DNT细胞与HIV疾病进展的关系，近一步探讨DNT细胞在HIV感染中的作用。 方法： 选择选取北京佑安医院规律随访的AIDS患者240例，根据其病程进展分为两组,一组为1年内CD4细胞计数始终500个/ul(CD4high组),共157例;另一组为1年内其CD4细胞计数进展到500个/ul，在1年的时间内CD4始终保持到大于500个/ul)及健康对照组中的分布情况。 通过流式细胞技术检测外周血PBMC中DNT细胞水平发现DNT细胞占CD3细胞的百分比在CD4high组、健康对照组和CD4low组中依次增高，CD4low组中明显高于CD4high组和健康对照组，差异均具有统计学意义(6.96±0.32%VS5.47±0.21%t=3.989，p=0.0001;6.96±0.32%VS5.89±0.289%t=2.490，p=0.013)，DNT细胞占CD3+细胞的百分比在健康对照组中和CD4high组相比较差异无统计学意义(t=1.169，p=0.243)，DNT细胞绝对值在CD4low组和CD4high组间差异无统计学意义(95.04±5.90个/ul VS96.37±3.46个/ul t=0.207，p=0.836), DNT细胞绝对值在CD4low组和健康对照组间比较差异也无统计学意义(95.04±5.90个/ul VS93.82±4.51个/ul t=0.166，p=0.868)，DNT细胞绝对值在CD4high组和健康对照组间比较差异无统计学意义(t=0.446，p=0.655)。 (2) DNT细胞与CD4细胞的相关性 HIV-1感染中DNT细胞占CD3细胞的百分比和CD4细胞计数呈负相关(R=-0.372,P=0.0002), DNT细胞绝对值和CD4细胞计数无相关性(R=-0.186,P=0.053)。而健康对照组中DNT细胞占CD3细胞的百分比和DNT细胞绝对值与CD4细胞计数均无相关性(R=0.073,P=0.48;R=0.208,P=0.063)。 (3) DNT细胞与病毒载量的相关性 DNT细胞占CD3的百分比及DNT细胞绝对值 在病毒载量Log10vl4.5(copies/ml)组中均明显高于病毒载量Log10vl4.5(copies/ml)组,差异均有统计学意义(6.815±0.33%VS5.679±0.255%,t=2.697，p=0.0075;113.6±6.411个/ul VS92.50±4.074个/ul，t=2.907，p=0.004)。 (4)CD4high组和CD4low组各随访点DNT细胞比值、DNT细胞绝对值，CD4+细胞计数，病毒载量的动态变化情况比较 DNT细胞占CD3细胞的百分比在1年的时间里，CD4low组在各个随访点的值均高于CD4high组。然而DNT细胞绝对值在随访的1年的时间里，各个随访点的值并不均高于CD4high组，在第3个月和第6个月的随访点中，CD4low组的DNT细胞绝对值低于CD4high组。CD4low和CD4high两组患者均出现CD4细胞计数先急剧下降，3个月时CD4细胞计数下降到最低值，接着CD4细胞计数上升，到达一定阶段再下降，最后不变的一个变化规律。CD4high和CD4low这两组患者病毒载量在随访的1年时间里CD4low组在各个随访点的值均高于CD4high组，并且它们还具有一个共同的特征：病毒载量先急剧上升，到达3个月时病毒载量达到最高，4月、5月、6月病毒载量依次下降，到达6月时下降到最低，然后随着疾病的进程，到12月时病毒载量再次升高。 结论： (1)CD4high组、健康对照组和CD4low组DNT细胞比值依次升高，提示DNT细胞比值与HIV感染疾病进展明显相关。 (2)CD4high组和健康对照组DNT细胞比值明显低于CD4low组，提示低水平的DNT细胞对HIV感染后疾病不进展具有保护作用。 (3) HIV-1感染中DNT细胞比值和CD4+细胞计数呈负相关，DNT细胞比值在病毒载量高组患者中明显高于病毒载量低组患者，提示DNT细胞与疾病进展负相关。