血小板裂解液联合国产多孔钽对MG63细胞增殖以及ITGβ1/Vinculin/F-actin信号通路表达的影响

作     者：孙福斋 

作者单位：华北理工大学 

学位级别：硕士

导师姓名：王志强

授予年度：2018年

学科分类：08[工学] 080501[工学-材料物理与化学] 0805[工学-材料科学与工程（可授工学、理学学位）] 080502[工学-材料学] 

主      题：血小板裂解液 多孔钽 MG63细胞 ITGβ-1 Vinculin F-actin 

摘      要：目的研究探索血小板裂解液(platelet lysate,PL)联合国产多孔钽材料对MG63成骨细胞的增殖以及ITGβ1/Vinculin/F-actin信号通路表达的影响。方法实验分组:空白对照组(A组):MG63细胞培养;B组(B组):将梯度差异体积分数的PL和MG63细胞共同培养(筛选出PL作用最佳的体积分数);多孔钽组(C组):多孔钽支架材料与MG63细胞共同培养;PL-多孔钽组(D组):PL、多孔钽支架材料与MG63细胞共同培养。1应用扫描电子显微镜(SEM)观察多孔钽材料及PL-多孔钽-MG63细胞复合物的表面形态;2 CCK-8(Cell Counting Kit-8)法检测MG63细胞的增殖状态;3实时荧光定量PCR(Quantitive Real-time PCR,q PCR)、免疫细胞化学染色、Western-blot法检测MG63细胞整合素β1(Integrinβ1,ITGβ1)、黏着斑蛋白(Vinculin)、束状肌动蛋白(F-actin)m RNA和蛋白的表达情况。结果1 MG63细胞复苏第1天,外观呈球形,24h后贴壁生长,呈长梭形或多角型,胞浆向外伸出伪足形成突起。第3天,细胞快速生长,体积增大,部分伪足相互交汇,细胞成片生长,形态不易区分。2扫描电镜观察多孔钽材料表面及断面可观察到20-50μm大小的细小颗粒,呈均匀分布、直径大小约400-600μm的孔隙结构,内部呈三维结构,相互连通。电镜下,可观察到MG63细胞粘附在支架材料周围,伸出伪足,相互融合成片并分泌细胞基质覆盖于结构表面及空隙内。3CCK-8研究结果显示,体积分数为7%的PL促进MG63细胞增殖活性最显著,筛选作为本实验的B组;随着培养时间的延长,各组细胞均能实现良好的贴壁、生长,快速增殖之后稳定扩增。经统计学分析,B组与C组的细胞增殖效果优于A组,差异有统计学意义(P0.05);相较于其他组别,D组细胞增殖活性最佳,差异有统计学意义(P0.05)。D组各因子的表达量高于其他组别,差异有统计学意义(P0.05)。D组各因子m RNA的表达水平显著高于其他组别,差异有统计学意义(P0.05)。D组各检测因子的蛋白表达量显著高于其他组别,差异有统计学意义(P0.05)。结论PL、国产多孔钽支架材料能协同促进MG63细胞的增殖,并能上调ITGβ1/Vinculin/F-actin信号通路m RNA及蛋白的表达,该信号通路的激活可能对MG63细胞的增殖、粘附及分化具有积极作用。由此,PL可作为骨移植植入材料修复骨组织缺损的辅助药物,促进骨长入,为PL联合多孔钽治疗骨折、骨缺损提供科学的理论依据。