Genistein对视网膜血管新生的抑制作用及机制的研究

作     者：邹颖 

作者单位：南京医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：王斌;肖继皋

授予年度：2003年

学科分类：1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100706[医学-药理学] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：Genistein 视网膜血管新生 血管内皮生长因子 氧诱导因子lα 视网膜色素上皮细胞 氯化钴 缺氧。 

摘      要：视网膜新生血管形成是糖尿病视网膜病、视网膜中央静脉阻塞、老年性黄斑变性等的严重并发症，与其相伴的渗出、出血、增生等一系列病理改变可严重破坏眼的结构和功能，导致患者视力障碍。血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)在视网膜新生血管形成性疾病中起着非常重要的作用。 流行病学研究显示东亚地区乳腺癌和前列腺癌的发病率远低于西方国家，这种差异与东亚地区食用较多的豆制品及体内异黄酮水平较高有一定关系。Genistein(Gen)，是大豆异黄酮的主要成份之一。Gen对肿瘤的预防及治疗作用的机制可能涉及抑制蛋白酪氨酸激酶及拓扑异构酶Ⅱ、诱导肿瘤细胞调亡、逆转肿瘤细胞的多药耐药性、抑制肿瘤组织新生血管的形成等。Gen也可抑制实验性视网膜色素上皮外科清创术后脉络膜血管的新生，但对视网膜新生血管的形成是否有影响尚属未知。 Smith L等报道的可定量的氧致血管增生性视网膜病变的动物模型为探讨视网膜新生血管的发生机制及药物疗效的评价提供了科学的方法。我们选用了C57BL／6小鼠，将各10只出生后7天的小鼠放置于75％氧含量的密闭干燥器中，5天后置于常氧环境，分别给予0、50、100、200mg／kg体重的Gen，于21日龄处死;另10只同龄小鼠生活在常氧环境作为对照。通过计数矢状面6μm视网膜切片中突破内界膜的血管内皮细胞数来定量的分析视网膜血管新生的程度。随机抽取部分视网膜切片同时进行VEGF和HIF1α(hypoxia inducible factor 1α，HIF-1α)免疫组织化学染色。结果发现：高氧处理后，0剂量组(相对缺氧组)视网膜切片中突破内界膜的血管内皮细胞数 南京医科大学硕士学位论文 较对照组显著增加（P0．00X 50、100、200mg／kg体重 Gen 给药组均较相对缺氧组明显减少，分别为Zo．92 t 4．7O、17．16 t 3．98、***3．42。与对照组相》，相对缺氧组小鼠视网膜内 层 VEGF和＊F刁 的表达明显增强;Gen给药组 VEGF和 HIF一 a的表达较相对缺氧组减弱。 为进一步探讨细胞水平上Gen抑制视网膜血管新生可能 的机制，我们研究了氯化钴模拟缺氧及物理缺氧两种缺氧方式 可体汁冶乔的兄W网腮已亥上反k幻1＊刨 口1巨＊＊me口nhCI山＊． RPE）细胞 VEGF表达的诱导作用，FX H Gen对其表达的影响。 我们采用免疫荧光组织化学技术和激光共聚焦显微镜，以荧光 比值来表示VEGF蛋白的表达，半定量分析氯化钴及缺氧处理 不同时间对体外培养的RPE细胞VEGF蛋白表达的诱导作用， 以及 Gen对氯化钻诱导的 VEGF表达的影响。结果显示：对照 组呈现低水平VEGF。氯化钴可诱导RPE细胞VEGF蛋白的表 达，随着处理时间的延长，荧光比值的变化表现为时间依赖性， 4h点荧光强度是 oh 点的 3倍，在 6h点达到高峰。Gen（5 0、 100、200pmol几组）与对照组相比，均可明显抑制氯化钴诱 导的VEGF 的表达，且此种抑制作用呈浓度依赖性;缺氧 （5％COZ旧5％NZ）可诱导 RPE细胞VEGF蛋白的表达，随着 缺氧时间的延长，荧光比值的变化表现为时间依赖性，6h点达 到高峰，峰值是 oh 点的 3倍。Gen（50、100、200 q mol／L组） 与对照组相比，均可明显抑制缺氧诱导的VEGF的表达，且此 种抑制作用呈浓度依赖性。 综上所述，Gen可抑制氧致血管增生性视网膜病变动物 模型中视网膜血管新生，免疫荧光标记结果显示Gen可抑制缺 氧诱导的 VEGF和＊Fl 的表达，细胞实验结果显示 Gen可 抑制氯化钴及缺氧诱导的RPE细胞VEGF蛋白的表达，提示 Gen对视网膜新生血管形成性疾病具有潜在的预防及治疗价 值。