组蛋白H2AX的磷酸化与细胞周期相关性的分析

作     者：岳阳平 

作者单位：华中科技大学 

学位级别：硕士

导师姓名：龚建平

授予年度：2010年

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 10[医学] 

主      题：γ-H2AX 流式细胞术 DNA损伤 DNA修复 细胞周期 细胞凋亡 

摘      要：目的:对组蛋白H2AX的磷酸化(γ-H2AX)与细胞周期的相关性作一分析并探讨,为了进一步研究组蛋白H2AX的磷酸化(γ-H2AX)在机体中的作用积累资料。方法:MOLT-4细胞、加PHA培养48h的PBLs和不加PHA的PBLs在经紫外线照射处理后,分别于不同的时间点收取细胞,使用具有荧光标记的γ-H2AX抗体,特异性的标记位于细胞核内的DNA双链断裂(DNA double-strand breaks, DSBs)位点处的γ-H2AX焦点,然后用流式细胞仪进行定量检测并分析DNA的损伤程度,并用流式细胞仪以亚G1峰法(sub-G1 peak)对细胞周期和细胞凋亡进行检测,使用免疫印迹法(western blot)检测γ-H2AX的表达。结果:MOLT-4细胞、加PHA培养48h的PBLs和不加PHA的PBLs在经紫外线照射处理后,随着时间的推移,在DNA直方图上均出现了明显的亚G1峰,并且凋亡细胞逐渐增多;均出现了γ-H2AX荧光强度的增加,随着时间的推移,该增加有先增多后减少的趋势;加PHA培养48h后的PBLs,进入细胞周期并出现了S、G2/M期细胞,不加PHA的PBLs没有进入细胞周期。免疫印迹结果提示,γ-H2AX的表达随着时间的推移增加,并有先增多后减少的趋势。结论:组蛋白H2AX的磷酸化(γ-H2AX)在静止期和增殖期的细胞均可表达,随着时间的推移,γ-H2AX的表达有先增多后减少的趋势。