9-硝基喜树碱脂质体对胆管癌TFK-1细胞周期和凋亡的影响

作     者：卢进利 

作者单位：华中科技大学 

学位级别：硕士

导师姓名：邹声泉

授予年度：2011年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：9-硝基喜树碱 脂质体 细胞周期 细胞凋亡 TFK-1 

摘      要：目的研究9-硝基喜树碱脂质体(9-nitrocamptothecin loaded liposomes,9-NC-LP)及9-硝基喜树碱( 9-nitrocamptothecin ,9-NC)对胆管癌细胞TFK-1的细胞周期和凋亡的影响及作用机制,同时对脂质体作为9-NC纳米载体的可行性进行评价。方法用不同浓度的9-NC和9-NC-LP(0ng/ml、0.4ng/ml、4ng/ml、40ng/ml、400ng/ml、4000ng/ml)细胞培养液孵育胆管癌细胞TFK-1 24h、48h、72h,然后MTT法测细胞抑制率,用不同浓度的9-NC和9-NC-LP(0ng/ml 40ng/ml、80 ng/ml、160ng/ml、320ng/ml、640ng/ml)细胞培养液孵育TFK-1胆管癌细胞24h、48h、72h,利用流式细胞仪检测的周期的分布及凋亡率,利用western blotting检测CDK2、Cyclin D、Cyclin E、Cyclin A、P27、P53、Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、线粒体相关凋亡诱导因AIFM-1、Bax及Bcl-2的表达变化。结果孵育24h、48h后,9-NC组和9-NC-LP组对TFK-1的抑制率没有显著性差异,但孵育于72h后,9-NC-LP组对TFK-1的抑制率明显高于9-NC组。用9-NC和9-NC-LP孵育TFK-1 24小时后,9-NC对TFK-1引起S期的阻滞作用明显强于9-NC-LP,但孵育24小时和72小时后,9-NC对TFK-1引起S期的阻滞作用明显弱于9-NC-LP。当孵育72h后,9-NC-LP组Annexin V+PI-细胞数明显高于9-NC组。用9-NC和9-NC-LP孵育TFK-1 24小时后,cyclin A( F=20.20 ,P= 0.02)、P27(F=5.12 ,P=0.05 )、P53(F=101.85 ,P0.01)、caspase-3( F=25.37 ,P0.01)、caspase-9( F=11.42 ,P= 0.01)、Bax/Bcl-2( F=39.94 ,P0.01)的表达三组间有显著性差异。用9-NC和9-NC-LP孵育TFK-1 72小时后,cyclin A( F=310.66,P0.01)、cyclin E( F=8.26,P= 0.02)、cyclin D(F=396.03,P0.01)、P27( F=7.50,P= 0.02)、P53( F=944.62,P0.01)caspase-3( F=6.93,P=0.03)、caspase-8( F=7.01 ,P=0.03)、AIFM-1( F=7.54,P=0.02 )、Bax/Bcl-2 ( F=11.95 ,P=0.01)的表达三组间有显著性差异。结论9-NC-LP对TFK-1的生长和增殖有较强抑制作用。当孵育24小时后,9-NC-LP对胆管癌细胞TFK-1细胞周期S期阻滞和周期相关蛋白的影响弱于9-NC,孵育72小时后,则与9-NC相当,甚至强于9-NC,经脂质体纳米化的9-NC并没有降低它的药理作用,能显著上调Bax/Bcl-2,还具有明显的缓释作用,9-NC-LP是一种具有可观的应用前景的抗肿瘤药物。