抑瘤宁对消化系统肿瘤细胞体外增殖抑制作用的研究

作     者：张松 

作者单位：郑州大学 

学位级别：硕士

导师姓名：王留兴;樊青霞

授予年度：2007年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：中药复方 抑瘤宁 生长抑制率 细胞周期 凋亡 

摘      要：目的： 恶性肿瘤是严重威胁人类健康及生命的常见病，也是世界医学的一大难题。目前，主要采用手术、放疗、化疗及生物治疗等综合措施。对于中晚期恶性肿瘤患者，作为其主要治疗手段的化疗，虽然疗效肯定，但是由于其毒副作用大、价格昂贵，且存在多药耐药等问题，常导致病人机体状况的恶化及生命质量的降低，严重时致患者因不能耐受而放弃治疗。而中药尤其是中药复方治疗肿瘤从整体考虑，具有药源广泛、价格低廉、毒副作用小等优点。中药化学通过对单味中药或复方中药进行提取、分离、纯化、结构鉴定，寻找药物活性成分，是获得新的抗癌药物的重要途径，也正在成为抗肿瘤药物研究的热点。 抑瘤宁为纯中药复方制剂，由Rab、Aca、Sol、Duc组成，临床用于治疗消化系统肿瘤，疗效肯定，无明显毒副作用。根据本课题组前期对四味中药粗提物实验结果，Rab与Due两药联用和Rab、Aca、Sol、Duc四药联用体外能明显地抑制消化系统肿瘤细胞的生长;四药联用时，能使Eca-109细胞阻滞于S期，并诱导细胞凋亡。迄今尚未对其有效抗肿瘤成分进行药效学实验研究，方剂组成及用药剂量尚待通过实验进行优选。本实验以人食管癌Eca-109、人胃癌BGC-823、人肝癌Bel-7402、人结肠癌Ls-174t细胞为实验对象进行体外抗肿瘤实验，通过文献查阅，从Rab中选取成分A—Oridonin，Aca中选取成分B—ASS(Acanthopanax Senticosus)，Sol中选取成分C—Solanine，Duc中选取成分D—Ducheside，以A为主要成分，与B、C、D进行两联、三联、四联等组合，根据细胞毒性最大、药物剂量最小的原则从中筛选出最佳的药物组合。 方法： ***法测定各实验组对Eca-109、BGC-823、Bel-7402、Ls-174t细胞的生长抑制率。取对数生长期的细胞，接种于96孔板上培养24h后，设空白对照组和实验组，每个浓度设6个平行孔重复三次，分别作用于Eca-109、BGC-823、Bel-7402、LS-174t细胞48h，测定细胞生长抑制率。 2．用倒置显微镜观察药物作用于Eca-109细胞48h后的形态学变化。 3．用流式细胞仪检测Eca-109细胞周期分布和凋亡率。 4．统计学分析采用统计软件SPSS10.0，采用单因素方差分析及χ检验对数据进行分析，以α=0.05为检验水准。 结果： 1．对Eca-109、BGC-823、Bel-7402、Ls-174t细胞的生长抑制作用。 1．1对Eca-109细胞的生长抑制作用。以两药联用“A(10μg／mL)+B(1mg／mL)，三药联用“A(15μg／mL)+B(1mg／mL)+C(0.4mg／mL)、“A(10μg／mL)+B(1mg／mL)+D(3.2mg／mL)，四药联用“A(10μg／mL)+B(0.5mg／mL)+c(0.4mg／mL)+D(1.6mg／mL)时细胞生长抑制率最高，可达100％。 1．2对BGC-823细胞的生长抑制作用。以两药联用“A(20μg／mL)+B(1mg／mL)，三药联用“A(20μg／mL)+B(1mg／mL)+C(0.8mg／mL)、“A(30μg／mL)+B(1mg／mL)+D(3.2mg／mL)，四药联用“A(15μg／mL)+B(0.75mg／mL)+C(0.4mg／mL)+D(3.2mg／mL)时细胞生长抑制率最高，可达100％。 1．3对Bel-7402细胞的生长抑制作用。两药联用以“A(15μg／mL)+B(2mg／mL)抑制率最高，为90.80％;三药联用以“A(30μg／mL)+B(1mg／mL)+C(1.6mg／mL)抑制率最高，为76.31％;四药联用以“A(20μg／mL)+B(1mg／mL)+C(0.4mg／mL)+D(3.2mg／mL)时细胞生长抑制率最高，可达94.23％。 1．4对Ls-174t细胞的生长抑制作用。两药联用以“A(30μg／mL)+B(1mg／mL)抑制率最高，为31.46％;三药联用以“A(20μg／mL)+B(1mg／mL)+C(0.8mg／mL)抑制率最高，为28.76％;四药联用以“A(20μg／mL)+B(1mg／mL)+C(0.8mg／mL)+D(1.6mg／mL)时细胞生长抑制率最高，可达36.54％。 2．用流式细胞仪检测Eca-109细胞周期分布和凋亡率。 各实验组作用于细胞48h后，S期细胞百分率明显升高，G／G期细胞百分率明显下降。呈现凋亡所特有的亚G峰，凋亡率升高，与空白对照组相比差异具有统计学意义(P0.05)。 结论： 1．A与B两药联用或A、B、C与D四药联用都能明显的抑制Eca-109、BGC-823、Bel-7402、Ls-174t细胞的生长。 2．A、B两药