DEHP对雄性中国林蛙肝细胞的雌激素效应和凋亡的影响

作     者：王娟娟 

作者单位：陕西师范大学 

学位级别：硕士

导师姓名：张育辉

授予年度：2013年

学科分类：0908[农学-水产] 09[农学] 

主      题：DEHP 中国林蛙 肝细胞 雌激素受体 卵黄蛋白原 细胞凋亡 Bax Bcl-2 

摘      要：近年来,伴随着工农业的迅速发展,大量人工合成的化合物的被不断释放到自然界,在野生动物的生存环境中,许多化合物可干扰动物的正常生长与发育。邻苯二甲酸酯（phthalatic esters,PAEs）是一类广泛应用于塑料工业的增塑剂,对动物产生雌激素效应,邻苯二甲酸二乙基已酯（di-2-ethylhexyl phthalate,DEHP）是其中的一种,有关DEHP对两栖动物的肝组织的雌激素效应以及对于肝细胞凋亡的影响尚未见报道。本实验以雄性中国林蛙（Rana chensinensis）为对象,探讨DEHP对雄性成体动物的雌激素效应以及对肝细胞的凋亡的影响。揭示DEHP影响雄性的繁殖力的机制以及对肝细胞的毒性。 本实验将中国林蛙（Rana chensinensis）雄性成体分别暴露在10-7、10-6、10-5、10-4mol·L-1DEHP水体20d、30d、40d,取其肝组织,用免疫组织化学方法检测肝细胞中雌激素受体（estrogen receptor, ER）、卵黄蛋白原（vitellogenin, VTG）、Bax和Bcl-2蛋白的表达。用末端转移酶法（TUNEL）检测肝细胞的凋亡。结果如下： 1.免疫组化检测结果表明,通过DEHP暴露处理后,雄性林蛙肝细胞质中均有VTG阳性反应。对VTG表达相对值的检测统计表明,与对照组相比,各DEHP处理组的VTG表达显著上调,且VTG表达量随着DEHP浓度的升高而增高,但随暴露时间延长的变化不具有规律性。 2. DEHP处理后,林蛙肝细胞的胞质和胞核中均有ER阳性反应。ER表达相对值检测表明,各DEHP组的肝细胞ER表达相对值均高于对照组,ER表达在一定暴露时间范围随DEHP浓度的升高而上调,但随暴露时间延长的变化规律不明显。ER与VTG表达趋势的相似性表明,DEHP可通过高调肝细胞ER表达诱导VTG合成。 3.对肝组织进行TUNEL检测,DEHP处理后部分肝细胞呈深黑色。对肝细胞凋亡率（AI）统计显示,对照组的AI为3.43%,在DEHP组暴露40d,AI为20.37±2.13%;在10-4mol·L-1DEHP组暴露40d,AI为28.38±±1.03%,达到峰值。总体显示,AI随DEHP浓度的升高和暴露时间的延长均呈现剂量效应和时间效应。但在10-5mol·L-1DEHP组,暴露40d比30d的AI有所下降。 4.免疫组化检测肝细胞中Bax和Bcl-2表达显示,DEHP处理后,Bax和Bcl-2表达随着DEHP浓度升高而上调,随着暴露时间的延长Bax表达相对值呈增高趋势,而Bcl-2表达相对值呈下降趋势。对AI与Bax/Bcl-2表达量比值的相关性分析显示,肝细胞的AI与Bax/Bcl-2之间具有显著性的正相关。表明DEHP通过影响肝细胞Bax表达上调和Bcl-2表达下调而导致肝细胞凋亡。