酵母甘油-3-磷酸脱氢酶（GPD）基因转化油菜的研究

作     者：吴尚虹 

作者单位：湖南农业大学 

学位级别：硕士

导师姓名：胡家金;熊兴华

授予年度：2012年

学科分类：09[农学] 0901[农学-作物学] 

主      题：甘蓝型油菜 GPD基因 农杆菌介导 基因克隆 

摘      要：油菜（Brassica napus L.）是我国种植面积最大,地区分布最广的油料作物,是我国重要的植物油来源。同时,油菜的种子油是一种可持续利用的生物资源。利用基因工程技术对油菜脂肪酸合成相关基因的表达进行调控,可望提高油菜的脂肪酸含量,改良其品质及创造出新型种质资源。本试验以酿洒酵母为材料,对脂肪酸合成相关基因——甘油-3-磷酸脱氢酶基因（GPD）进行克隆,对其进行生物信息学分析,并且与种子特异性napin启动子构建新型的表达载体。同时以湘油15号为材料,对油菜的子叶柄及下胚轴再生体系及遗传转化进行了研究。本试验研究完成了以下工作并取得相关结果： ***基因的克隆和序列分析 根据GenBank中同源序列,设计引物,从酵母基因组DNA中PCR扩增分离GPD1和GPD2基因。PCR产物克隆到pGEM-T载体上并进行测序。结果显示,克隆的GPD1含1175个核苷酸,克隆的GPD2含1324个核苷酸,与yg3、NM001183314的同源性分别达99.4%和99.5%。 ***基因的植物表达载体构建 PCR产物克隆到pGEM-T载体后用BamHI/SacI酶切,酶切小片段插入pBl121、pBI121.N同样的酶切位点处,分别构建成GPD基因表达载体G1、G2、NG1、NG2。通过冻融法将其转化农杆菌LBA4404,并经菌落PCR验证。 3.油菜的遗传转化和转基因苗的获得 将携带G1、G2、NG1、NG2的农杆菌LBA4404侵染湘油15号油菜子叶柄和下胚轴外植体,获得转基因再生植株,PCR检测证明外源基因已整合到湘油15再生植株基因组中。