龙葵中活性成分的提取、纯化及测定研究

作     者：刘覃 

作者单位：中南大学 

学位级别：硕士

导师姓名：陈晓青

授予年度：2005年

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 10[医学] 

主      题：龙葵 多糖 总生物碱 提取 测定 纯化 

摘      要：本文研究了中药龙葵(Solanum nigrum L.,S.N.L.)中两类活性成分—多糖及总生物碱(Total Steriodal Alkaloids,TSA)的提取、纯化及测定方法。 (1)确定了多糖和TSA的最优提取条件。采用优于传统回流提取的微波辅助提取,以蒸馏水为溶剂,在325W下浸提15min,料液比为1:20,多糖得率达1.94%:并对提取机理进行了探讨。以95%乙醇溶液为溶剂,在455W下浸提8min,料液比为1:20,TSA得率为26.38μg/g;在探究提取机理的同时,采用薄层色谱法研究了微波作用对TSA结构的影响。 (2)分别探讨了多糖、蛋白质、澄清度和TSA的测定方法。 采用苯酚—硫酸法结合DNS法对多糖进行测定,确定了最佳检测条件:总糖含量与吸光度值在18.0～66.0μg/mL范围内线性关系良好;单糖含量与吸光度值在0.40～2.00mg/mL范围内有良好线性关系。 采用改进考马斯亮蓝法分析测定了多糖中蛋白质的含量。线性回归方程A=-0.0604+0.84543x,R=0.9997。 确定了检测样品液澄清度的试验条件参数。以440nm处的吸光度和660nm处的透过率为指标,分析纯化处理前后样品的澄清状况。 采用酸性染料比色法对TSA进行了测定,TSA含量与吸光度值在3.20～16.0μg/mL范围内线性关系良好。 (3)研究了多糖的纯化工艺并对最终产品进行了初步表征。 采用4000r/min下高速离心10min去除不溶性杂质。 采用天然澄清剂ZTCi+1—Ⅱ—NKA-9大孔树脂联用吸附澄清,最佳工艺参数为:澄清剂两组份加入顺序先B后A;加入量B6%(v/v),A3%;澄清温度B80℃,A60℃;提取液处理浓度1:5(g/mL)。树脂洗脱体积3.2mL(每1mL样品液);树脂用量为干树脂质量:提取液上样体积=0.4g/mL。此时样品液在660nm处的透过率从5.40%上升到88.8%,440nm处的吸光度则从2.69下降到0.258。 研究了采用酶解—Sevag法联用去除多糖中的蛋白质,确定了最佳清除条件:酶解温度46℃,酶解时间7.5h,胰蛋白酶用量2%