Notch1、Jagged1在重度子痫前期患者胎盘中的表达及意义

作     者：薛闪辉 

作者单位：郑州大学 

学位级别：硕士

导师姓名：张展

授予年度：2016年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100211[医学-妇产科学] 10[医学] 

主      题：重度子痫前期 Notch1 Jagged1 滋养细胞 

摘      要：子痫前期是妊娠期特有疾病,属于妊娠期高血压疾病的五种状况之一,其主要的临床表现是孕妇在妊娠20周后出现的高血压,蛋白尿,同时可能出现全身各脏器功能异常。临床上根据病情轻重将子痫前期分为轻度子痫前期和重度子痫前期,而重度子痫前期又因发病孕周不同分为早发型重度子痫前期和晚发型重度子痫前期。子痫前期的发病率较高,在我国约为9.4%,且重度子痫前期有许多严重的并发症,严重危害母婴健康,是造成孕产妇及围产儿死亡的主要原因之一。子痫前期患者的基本病理改变为全身小血管痉挛,可以使脑、心、肝、肾等重要脏器血供受限,造成孕妇全身脏器功能损害,同时胎盘部位血管痉挛使血流灌注减少,胎盘缺血缺氧,最终可能导致胎盘早剥,胎儿宫内生长发育受限,甚至胎儿死亡。由于子痫前期发病率高、并发症严重,国内外许多学者对其发病机制进行了大量研究,虽然现在并未完全阐明,但已形成的发病机制较多,其中包括有滋养细胞侵袭异常、免疫调节功能异常、内皮细胞损伤、遗传因素和营养因素等。由于子痫前期的症状在胎盘娩出后可以很快自愈或缓解,因此有学者认为胎盘形成异常与子痫前期发生有一定联系。胎盘主要是由滋养细胞发育形成的,滋养细胞具有高度分化、增殖及浸润等特性,与肿瘤细胞增殖、浸润的特性十分类似。许多研究表明滋养细胞侵袭异常会影响胎盘血管形成,造成胎盘浅着床,可能最终导致病理妊娠如子痫前期。Notch信号通路是进化上十分保守的蛋白通路,对于细胞的增殖、分化、凋亡等都有一定影响。经典Notch信号通路的激活是通过相邻细胞的配体与受体相互作用,通路激活后Notch受体经过三次剪切,胞内段(NICD)被活化释放,并进入细胞核与转录因子CSL结合,形成NICD/CSL转录激活复合体,从而激活HES、HEY、HERP等转录抑制因子家族的靶基因,最终抑制或活化目的基因的转录。已有大量研究发现Notch信号通路在多数肿瘤组织中呈现高表达状态,并且可以促进肿瘤细胞的增殖及肿瘤血管的形成。Notch信号通路有许多受体及配体,Notch1是Notch信号通路的主要受体之一,Jagged1是主要配体之一。已有研究发现Notch信号通路影响滋养细胞的侵袭,Notch家族蛋白在妊娠的各个阶段的胎盘组织中均有表达;有研究用免疫组化法检测到正常胎盘组织滋养细胞或血管内皮细胞表达Notch1蛋白、Jagged1蛋白。这些研究结果显示Notch信号通路可能参与了胎盘的形成过程,然而Notch信号通路是否在子痫前期发病机制中起一定作用现鲜有报导。本研究主要是通过比较Notch1、Jagged1m RNA和蛋白在正常妊娠孕妇胎盘组织与重度子痫前期患者胎盘组织中的表达情况,初步探讨Notch信号通路与重度子痫前期的关系。目的本研究主要是探究Notch1、Jagged1m RNA和蛋白在正常妊娠孕妇胎盘组织和重度子痫前期患者胎盘组织中的表达情况,初步探讨Notch信号通路尤其是Notch1、Jagged1与重度子痫前期的关系。材料和方法1研究对象选取2013年12月至2014年12月就诊于郑州大学第三附属医院的重度子痫前期患者胎盘组织共60例,其中包括早发型重度子痫前期患者胎盘组织30例,晚发型重度子痫前期患者胎盘组织30例。重度子痫前期诊断及分类标准按第八版妇产科教材。同时选取正常足月产孕妇胎盘组织30例作为正常足月组,因宫颈机能不全或社会因素行中孕引产者的胎盘组织30例作为早产组。以上各组研究对象妊娠前后除了重度子痫前期外均无其他内科、外科合并症,本次妊娠均为单胎妊娠。本实验经本院伦理委员会批准,标本提供者均知情同意。2方法在胎盘娩出的15分钟内收取胎盘标本,整个操作过程严格遵照无菌原则,取材过程中避开胎盘钙化区、坏死处。将剪取的组织块放在消毒过的滤纸上吸取血液,处理完毕后将胎盘组织分成2份,1份剪成若干条状装入冻存管中并标号,冻存管可以放入液氮中暂时储存,最终放入-80℃冰箱保存。另外1份放入培养皿中,用生理盐水反复冲洗干净后用10%中性福尔马林固定,最终用于免疫组化实验。用免疫组化方法检测Notch1、Jagged1蛋白在胎盘组织中的定位及相对表达量。另外应用实时荧光定量(RT-PCR)方法检测各组胎盘组织中Notch1m RNA、Jagged1m RNA表达量。3统计学处理采用SPSS19.0软件对本实验数据进行统计学分析。其中计量资料用x±s表示,两组间比较符合正态分布、方差齐性,采用两独立样本的t检验;等级资料的比较采用非参数秩和检验。以α=0.05为检验水准。结果1各组孕产妇一般临床数据的比较晚发型重度子痫前期组、正常足月组、早发型重度子痫前期组及早产组的产妇平均年龄分别为29±4岁、26±3岁、28±4岁、27±3岁;生产时平均孕周分别为38.1±1.1周、39.3±0.7周、27.3±0.6周、28.5±1.