抗吕氏泰勒虫重组表面蛋白（rTlSP）对绵羊的免疫保护效果评估

作     者：韩元 

作者单位：西北民族大学 

学位级别：硕士

导师姓名：蔡葵蒸;李有全

授予年度：2018年

学科分类：090602[农学-预防兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

主      题：吕氏泰勒虫 原核表达 rTlSP 免疫保护效果 

摘      要：吕氏泰勒虫(Theileria luwenshuni)是由青海血蜱(Haemaphysalis qinghaiensis)和长角血蜱(***)传播的,寄生于绵羊、山羊及野生动物淋巴细胞、巨噬细胞和红细胞内的一种血液原虫。患畜表现发热、贫血、淋巴结肿大、四肢乏力及卧地不起等临床症状,可导致动物衰竭死亡,这给养羊业造成重大经济损失。由于化学药物防治存在耐药性和药物残留,以及蜱的叮咬可导致该病的反复发作等问题,疫苗免疫有望成为一种最具潜力的防治措施。TlSP(Theileria luwenshuni surface protein)是位于吕氏泰勒虫膜表面的蛋白,在子孢子和裂殖子阶段都有表达,其同源基因在环形泰勒虫、尤氏泰勒虫和绵羊泰勒虫中都已发现,是研制抗泰勒虫疫苗的候选抗原。现将研究内容总结如下:1.采用RT-PCR方法扩增其表面蛋白TlSP基因的cDNA片段,结合生物信息学方法,对TlSP抗原表位和跨膜区进行预测。结果表明该蛋白的N端具有较好的抗原性,而在C端存在3个跨膜区:18507 aa、22850 aa和25577 aa。只有去除全部跨膜区的重组载体成功表达。重组TlSP与吕氏泰勒虫、尤氏泰勒虫、绵羊泰勒虫及环形泰勒虫阳性血清发生反应,而与莫氏巴贝斯虫、羊无浆体阳性血清无交叉反应。2.免疫试验结果表明:对照组绵羊攻蜱后出现体温两次升高和淋巴结肿大症状,发病率为100%,死亡率为40%,染虫率在2.23%.5%之间。试验Ⅰ组和试验Ⅱ组绵羊表现轻度临床症状,染虫率在1.23%.89%之间,免疫后产生抗体最高滴度分别为1∶102 400和1∶25 600,发病率均为60%。重组TlSP抗原在抗泰勒虫感染上具有良好的免疫保护效果,且抗原量为150μg的免疫保护效果更佳,重组TlSP抗原能刺激特异性T淋巴细胞的增殖,显著提高机体IL-2、IL-4、IFN-γ的分泌水平。本研究为今后羊泰勒虫病亚单位疫苗的研制提供了实验数据。