紫杉醇与抗HER2单抗偶联及其体外抗肿瘤作用的研究

作     者：张秋影 

作者单位：吉林大学 

学位级别：硕士

导师姓名：张桂荣

授予年度：2009年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：紫杉醇 抗HER2单抗 免疫偶联物 乳腺癌 细胞凋亡 

摘      要：紫杉醇(taxol or paclitaxel)是红豆杉中特有的一种二萜类化合物,利用它作为主要成分,可以生产出世界公认的可治疗乳腺癌、子宫癌、卵巢癌、胰腺癌、结肠癌等10多种癌症的特效药物。但由于它的非特异性细胞毒性,在用于治疗肿瘤的同时,常对正常组织器官也造成严重的损害,使其在临床使用上受到限制。本实验针对紫杉醇抗癌作用所引起的上述问题,从药物设计着手,将紫杉醇靶向化来降低其对非特异性细胞的杀伤作用。 本实验利用抗体对肿瘤细胞表面抗原的选择特异性,对抗癌药物紫杉醇进行主动靶向设计研究,采用活化酯法将紫杉醇与抗HER2单克隆抗体偶联,其中采用核磁共振光谱及红外光谱对活化紫杉醇进行鉴定;采用葡聚糖凝胶层析法对偶联物纯化鉴定;并用酶联免疫吸附法(ELISA法)检测合成偶联物的抗体活性;然后通过四甲基偶氮唑盐法(MTT法)检测偶联物对乳腺癌MCF-7型肿瘤细胞的杀伤作用及通过流式细胞仪检测凋亡细胞的比率;再通过琼脂糖凝胶电泳及Western-blot方法检测偶联物作用后肿瘤细胞的DNA及蛋白含量变化。最后对实验结果数据进行分析,得出结论。 本实验通过将抗癌药紫杉醇与抗HER2单克隆抗体的偶联,增强紫杉醇抗肿瘤的靶向作用,降低其对人体其它脏器的毒副作用,使其在较低用量的同时具有较高的治疗效果。在制备方法上,为紫杉醇与抗体的成功偶联提供参考和依据:在临床应用上,低剂量高疗效低毒性的具有抗癌作用的紫杉醇-单抗偶联物,为紫杉醇在临床上的广泛应用也起到了一定的推动作用。