hDAF转基因猪器官移植实验研究

作     者：杨洪吉 

作者单位：暨南大学 

学位级别：硕士

导师姓名：余小舫

授予年度：2000年

学科分类：1002[医学-临床医学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100210[医学-外科学(含：普外、骨外、泌尿外、胸心外、神外、整形、烧伤、野战外)] 100102[医学-免疫学] 10[医学] 

主      题：人衰变加速因子,异种移植,灌注,多价可注射GAL,转基因猪 

摘      要：移植用供体器官在全世界范围的严重缺乏，已经促使在此领域的学者，对异种移植产生 了极大的兴趣。目前，转基因猪由于可以无限量繁殖，以及在解剖，生理很多方面和 人的相似性原因，已经被认为是人供体器官的可能来源。在完全不同种系之间的异种移 植，如，猪-狒狒，因为受体体内预先存在的天然抗体与供体器官血管内皮细胞上的α -galactosyl(α-Gal)糖表位结合，随后发生补体系统的激活，而最终将导致超急性排斥 （HAR）。 补体的激活可以被一组有种间特异性的蛋白-补体激活调解因子（RCAs），在可溶性状态和 细胞表面状态加以抑制。在体外表达人补体激活调解因子如，人衰变加速因子（hDAF），在 猪细胞表面表现了保护细胞免于人补体的溶解。出于此方面的考虑，剑桥大学通过显微 注射的方法，注射一段长6.5kb的DAF微小基因于猪的受精卵内，已经成功的培植出带有 hDAF的转基因猪。既往的实验已经表明，当hDAF转基因的猪心脏异位移植入cynomolgus 猴腹内后，心脏没有显示超急性排斥的表现，而且通过同时应用其他的免疫抑制剂如 ：cyclosporine,cyclophosphamide和methylpridnisolone可以获得生存期的延长。 在人类和高等灵长类动物体内的异种天然抗体的受体主要是Gal(Galα1-3Gal)。这种抗体 和受体的结合被认为是对猪异种移植器官超急性排斥的起点。很多发现也证明anti-Galα 1-3Gal抗体是异种天然抗体的主要部份而且对超急性排斥的病理起决定性的重要作用。 目前已经有很多实验证明，去除预先存在的天然抗体能够克服异种移植的超急性排斥， 尽管此时补体活性仍然保持在正常水平的90％，超急性排斥仍可以被抑制。去除天然抗 体的方法包括，体外连接异种器官吸附抗体;含Galα1-3Galbl-4GlcNAc吸附柱预先吸附 抗体等。 NOVARTIS目前已经生产出多价可注射的QGAL残基pAS）可以直接注射吸附抗体。 以往的研究之所以用Cyllolllolgt1S猴作为11DAF转基因猜的心脏异位移植的受体主要是由于 数量多的原因。然而，这种猴浪少有体重能够超过5k8的个体。因此，由于器官体积和 技术上的原因，该种灵长类动物不适合作为hDAF转基因猪器官的移植实验受体。所以 必须寻找一种比较大的灵长类幼物作为受体。恨多大的灵长类动物已经濒于灭绝，道义 上不允济用于实验研究。体积较大，而且数量众多的另外一种灵长类动物－拂狒被认为 是最适台的受体幼物。然而，已经有实验证明hDAF下凋非人灵长类动物补体活性的能 力不同。11DAF下调人血浆总补体活性的84％，CyllOllolgUS猴72％，拂拂朴体活性69％，和 恒河猴28％。明显恒河猴不适合作为受体，但是在CyllO。mIgtlS猴和拂狭之闯的3％的差别 是否会导致超急性排斥还不清笼，所以用狒狒模型作为hDAF转基因猜的实验受体成为 其识。本研究的主要目的有：（1）离体肝脏，肾脏灌注实验研究设计目的在干检验 IIDAF转基因保护肝脏，肾脏免于超急性抹斥的理论。（2）活体外肝脏，肾脏支持肝衰竭 及无’署模型的研究的目的是为临床应用提供技术经验，及检验11DAF转基因的保护作用。 （3）’肾脏移植研究的实施在于确定一个涅想的免疫抑制剂方案以达到异种移植器官的长期 存活并且进一步证实11DAFty基因能够保护’肾脏免于超急性抹斥反应。O）检测最新免疫 抑制剂，多价可注射Q名al残基闪AS）与其他免疫抑制剂同时应用能否显著降低预存的天 然抗体并且改善川4XR。 第一部分11DAF转基因猜肝脏离体滔注的实验研究 l，目的 使用新鲜人血灌注普通猪肝和转基因猜肝;以及用猪血滔注猜肝脏以比较、检验 1。DAF转基因保护异种移植肝脏免干超急性排