Th1/Th2型细胞因子对人乳腺癌细胞系MCF-7的生物学行为及ER表达的影响

作     者：段红洁 

作者单位：天津医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：邓为民

授予年度：2015年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：乳腺癌 MCF-7 Th1/Th2平衡 IFN-γ IL-4 ERα ERβ 

摘      要：目的:以人乳腺癌细胞株MCF-7为研究对象,探讨Th1型细胞因子IFN-γ和Th2型细胞因子IL-4对MCF-7的生物学行为的影响及机制以及其对雌激素受体(estrogen receptor,ER)亚型表达的影响。方法:*** IFN-γ和rh IL-4对MCF-7细胞生长特性的影响。MCF-7细胞进行常规体外培养,以不同浓度rh IFN-γ(0.1、1、10、50、100、250ng/m L)或rh IL-4(0.1、1、5、10、25ng/m L)分别处理细胞24、48、72、96h,MTT法检测细胞的增殖状况以确定最佳的工作浓度和工作时间。以此为基础,细胞分组如下:空白对照(无rh IFN-γ或rh IL-4处理)、M/IFN-γ(100ng/m L rh IFN-γ处理细胞96h)及M/IL-4(10ng/m L rh IL-4处理细胞96h)三组。采用流式细胞术分析各组的细胞周期分布情况;RT-PCR检测各组的凋亡抑制基因Bcl-2、Bcl-xl和XIAP的m RNA表达情况。*** IFN-γ和rh IL-4对MCF-7细胞成瘤、侵袭和转移能力的影响。采用双层软琼脂集落形成实验检测各组细胞的体外成瘤能力;细胞黏附实验检测各组细胞的黏附能力;采用RT-PCR和Western blot检测各组促血管生成因子VEGF及基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-9的表达情况;再利用Western blot检测各组的PI3K/Akt、Ras/Raf/MEK/ERK信号通路中Akt和Erk的磷酸化水平。*** IFN-γ和rh IL-4对MCF-7细胞ER表达水平的影响。采用Western blot检测各组ERα和ERβ的蛋白表达水平;采用ELISA检测MCF-7细胞分泌的IFN-γ和IL-4的水平;以相当于自分泌水平的rh IFN-γ或rh IL-4处理MCF-7细胞96h后,RT-PCR和Western blot检测细胞ERα和ERβ的表达水平。结果:***结果表明,与空白对照组相比,以100ng/m L rh IFN-γ处理MCF-7细胞96h后,可明显抑制细胞的增殖(1.07±0.05 vs 0.87±0.05,P0.01);M/IFN-γ组G01期细胞比例增多[(55.42±2.28)%vs(66.98±0.88)%,P0.01],S期比例明显减少[(27.61±3.11)%vs(15.36±0.94)%,P0.01],G2期所占比例无显著变化;M/IFN-γ组各凋亡抑制基因的表达水平无显著差异。与空白对照组相比,以10ng/m L rh IL-4处理MCF-7细胞96h后,可明显促进细胞的增殖(1.07±0.05 vs 1.38±0.06,P0.01);M/IL-4组G01期细胞比例减少[(55.42±2.28)%vs(37.77±5.93)%,P0.01],S期比例明显增多[(27.61±3.11)%vs(45.45±4.15)%,P0.01],G2期所占比例无显著变化;M/IL-4组凋亡抑制基因Bcl-2(1.35±0.02 vs 2.25±0.03,P0.01)、Bcl-xl(1.33±0.01 vs 2.27±0.02,P0.01)及XIAP(0.35±0.01 vs 0.60±0.03,P0.01)的表达水平均升高。2.与空白对照组相比,M/IFN-γ组的集落形成数目减少(112.00±3.95 vs74.12±1.11,P0.01);M/IFN-γ细胞黏附能力无显著差异;M/IFN-γ组的VEGF的m RNA(0.71±0.03 vs 0.45±0.02,P0.01)和蛋白(1.12±0.08 vs 0.78±0.03,P0.01)表达水平均明显下降;MMP-9的m RNA(0.29±0.03 vs 0.09±0.00,P0.01)和蛋白(1.00±0.10 vs 0.81±0.03,P0.01)表达水平显著下降,而MMP-2的表达水平无明显变化;M/IFN-γ组的Akt的磷酸化水平无显著变化,但Erk的磷酸化水平明显下降(1.33±0.01 vs 0.88±0.02,P0.01)。与空白对照组相比,M/IL-4组的集落形成数目显著增多(112.00±3.95 vs144.23±4.89,P0.05);M/IL-4细胞黏附Matrigel的能力显著增强[100.00%vs(128.57±5.97)%,P0.05];M/IL-4组的VEGF的m RNA(0.71±0.03 vs1.11±0.07,P0.01)和蛋白(1.12±0.08 vs 1.36±0.11,P0.01)表达水平显著升高;MMP-2的m RNA(0.11±0.00 vs 0.52±0.12,P0