若干斑马鱼转基因品系的建立及其初步功能研究
作者单位：湖南师范大学
学位级别：硕士
导师姓名：邓云;吴秀山
授予年度：2014年
主 题：心脏发育 cmlc2 HDGC3 Titin 转基因斑马鱼
摘 要：心脏形成是一个错综复杂的过程,信号途径与转录因子和粘附分子对心脏细胞增殖、分化,心脏细胞的多样性以及不同心脏细胞的形态发生起调控作用。通过构建心脏组织高表达基因启动子和增强子的转基因品系来确定基因的生物学功能,对理解心脏发育的机制和发展有效地治疗手段奠定了理论基础。 GFP和RFP可在不同物种中作为活体报告基因,真实地追踪基因的表达和蛋白质的定位,,因此可用于研究基因对心脏发育的调控功能。To12是发现于青鳉中的一个鱼源转座系统,利用To12转座酶系统构建转基因斑马鱼品系能显著提高转基因成功的效率,该To12转座子系统为斑马鱼心脏发育候选基因的功能研究提供了很大方便。 HDGC3基因是本研究室筛选鉴定的一个在心脏和肌肉中高表达的心脏发育候选基因。本室前期研究结果表明HDGC3在斑马鱼的心脏和肌肉组织中有高水平的表达,为了进一步研究HDGC3在心脏发育过程中的功能,本文基于To12转基因技术,建立了若干心脏转基因斑马鱼模型。我们分别利用斑马鱼cmlc2和Titin启动子构建了转基因表达载体pTo12(cmlc2:HDGC3-EGFP)和pTo12(Titin: HDGC3-EGFP),将这两个转基因载体分别与To12转座酶按照一定比例混合注射到斑马鱼一细胞期受精卵中,在荧光显微镜下筛选鉴定出有绿色荧光表达的胚胎,建立了稳定遗传的HDGC3斑马鱼转基因品系：Tg (cmlc2:HDGC3-EGFP)和Tg (Titin:HDGC3-EGFP),并初步分析了在转基因斑马鱼品系过表达HDGC3对心脏发育的影响;同时,我们克隆了HDGC3基因启动子序列,利用该启动子序列建立了Tg (HDGC3:EGFP)转基因品系。通过检测绿色荧光表达获得的结果表明：HDGC3基因在斑马鱼胚胎发育早期的心脏和肌肉表达。这些转基因斑马鱼实验模型的建立对于研究HDGC3基因在心脏发育中的功能具有重要意义。
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