L-meq对MDCC-MSB1细胞端粒酶活性影响的研究

作     者：郑梅竹 

作者单位：吉林大学 

学位级别：硕士

导师姓名：张玉静

授予年度：2007年

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 090102[农学-作物遗传育种] 

主      题：L-meq基因 多克隆抗体 马立克氏病 端粒酶 MDCC-MSB1 

摘      要：本研究利用现代分子生物学的研究手段和方法研究了L-meq基因在体外培养MDCC-MSB1细胞中的表达及其对端粒酶活性的影响。研究以MDV基因组为模板通过PCR方法扩增了L-meq基因，将其亚克隆构建原核表达质粒pET-28a-L-meq和真核表达质粒pcDNA3.1(+)-L-meq。将重组质粒pET-28a-L-meq转化表达受体菌Rosetta(DE3)感受态细胞中，经IPTG诱导表达，表达的融合蛋白带大约位于55kDa处，表达蛋白占菌体蛋白的18.88％。用纯化后的L-MEQ蛋白对獭兔进行常规免疫，得到较高效价的多克隆抗体(1：12800)。继而构建了L-meq基因的真核表达载体pcDNA3.1(+)-L-meq并将其转染鸡淋巴瘤细胞系MDCC-MSB1细胞。应用RT-PCR方法和Western-blot方法检测到L-meq基因在MDCC-MSB细胞中能够稳定表达，并抑制了端粒酶活性。利用实时荧光定量RT-PCR方法检测了转染前后chTERT的表达量，结果显示L-MEQ的稳定表达下调了chTERT mRNA的表达水平。 总之，本研究成功克隆了L-meq基因，应用其纯化蛋白制备了多克隆抗体，并研究了L-meq基因对鸡淋巴瘤细胞系MDCC-MSB1端粒酶活性的影响，推测L-MEQ蛋白可能通过抑制MEQ蛋白的功能而起到抑制表达meq基因的vvMDVⅠ的复制，进而抑制细胞的端粒酶的活性。这些研究结果都为进一步探讨L-meq的一些生物学特性和L-MEQ在抑制肿瘤发生过程中的重要作用奠定了基础，并且为相关肿瘤的研究提供了更多的理论参考。