五种扶正类抗癌中药对人乳腺癌干细胞亚群成瘤性影响的研究

作     者：张文涛 

作者单位：广西医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：陆云飞

授予年度：2012年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：乳腺癌 CD44+CD24-干细胞亚群 成瘤性 抗癌中药 

摘      要：[目的]：本研究采用免疫磁珠分选技术从人乳腺癌细胞系MCF-7中分选出乳腺癌干细胞亚群（CD44+CD24-）,并种植于裸鼠腋窝皮下。随机分组后,分别给予相应单味中药（人参,黄芪,当归,灵芝,天门冬）煎剂灌胃。观察五种扶正类抗癌中药对人乳腺癌干细胞CD44+CD24-亚群成瘤性的影响,通过检测免疫系统相关因子及肿瘤组织相关基因的表达,初步探讨其作用机制,同时进一步提升中药抗癌作用研究的水平和深度,为今后进一步研究中药抗癌机制提供依据和思路。[方法]：1.培养乳腺癌细胞株MCF-7,采用免疫磁珠分选技术从中分选出乳腺癌干细胞亚群（CD44+CD24-）,并继续培养分选出的干细胞亚群。2.裸鼠移植瘤建模与分组：近交系（BALB/c）裸鼠56只,适应性饲养一周后,采用皮下接种法将乳腺癌干细胞亚群（CD44+CD24-）接种于裸鼠右侧腋窝皮下,按随机法原则分为七组,即：人参组,黄芪组,当归组,灵芝组,天门冬组,表柔比星组,移植瘤模型组。3.给药：随机分组后次日开始给药,各中药组分别给予相应单味中药煎液灌胃,每日一次;移植瘤模型组给予等量生理盐水灌胃;表柔比星组腹腔内注射给药,三周一次,连续给药12周。4.给药期间,观察各组裸鼠成瘤时间,并定期测量肿瘤体积。给药结束,处死裸鼠,采集血液,剥离瘤组织,测量瘤重并计算抑瘤率。5.采用ELISA法测量各组裸鼠血清中TNF-α、IL-2的浓度。6.采用RT-PCR法检测各组裸鼠移植瘤组织中CD24mRNA及CD44mRNA的相对表达量。[结果]：1.各组裸鼠成瘤时间：与模型组及表柔比星组比较,各中药治疗组成瘤时间均有明显延长,差异有统计学意义（P0.05）;表柔比星组与模型组间差异无统计学意义（P0.05）。2.各组肿瘤体积、重量及抑瘤率：各中药组和表柔比星组裸鼠平均瘤体积和平均瘤重均明显低于模型组,差异均有统计学意义（P0.05）;人参组裸鼠平均瘤体积和平均瘤重低于表柔比星组,差异有统计学意义（P0.05）;其他四个中药组平均瘤体积和平均瘤重与表柔比星组比较,差异无统计学意义（P0.05）。人参组抑瘤率最高达到68.24%,其他四个中药组抑瘤率与表柔比星组相当。3.各组裸鼠血清中TNF-α的浓度：与模型组.比较,各中药组和表柔比星组裸鼠血清中TNF-α的浓度均有不同程度降低,差异有统计学意义（P0.05）;人参组低于表柔比星组,差异有统计学意义（P0.05）;其余四个中药组与表柔比星组比较,差异无统计学意义（P0.05）。4.各组裸鼠血清中IL-2的浓度：与模型组比较,给药的六组裸鼠血清中IL-2的浓度均有不同程度升高,差异有统计学意义（P0.05）：灵芝组高于高于表柔比星组,差异有统计学意义（P0.05）;其余四个中药组与表柔比星组比较,差异无统计学意义（P0.05）。5.各组裸鼠移植瘤组织中CD24mRNA的相对表达量：与模型组比较,其他六组裸鼠移植瘤组织中CD24mRNA表达均有不同程度下降,差异有统计学意义（P0.05）;中药组与表柔比星组间差异无统计学意义（P0.05）。6.各组裸鼠移植瘤组织中CD44mRNA的相对表达量：与模型组比较,其他六组裸鼠移植瘤组织中CD44mRNA表达均有不同程度下降,差异有统计学意义（P0.05）;中药组与表柔比星组间差异无统计学意义（P0.05）。[结论]：1.五种扶正类抗癌中药均能有效延长人乳腺癌干细胞亚群（CD44+CD24-）成瘤时间,同时还可有效抑制肿瘤的进一步生长。表明扶正类抗癌中药具有抑制人乳腺癌干细胞在裸鼠体内成瘤的作用。2.五种扶正类抗癌中药可有效降低人乳腺癌移植瘤裸鼠血清中免疫因子TNF-α的浓度,提高血清IL-2的浓度;同时可有效降低移植瘤组织中CD24mRNA及CD44mRNA的表达。提示这些可能是扶正类抗癌中药抑制肿瘤干细胞成瘤性的部分作用机制。3.木研究为抑制人乳腺癌干细胞成瘤性的研究提供了新的研究领域和思路,同时进一步提升了中药抗癌作用研究的水平和深度。