补肾健脾解毒法干预艾滋病肠道免疫机制及过度活化机制的相关研究

作     者：张远芬 

作者单位：广州中医药大学 

学位级别：硕士

导师姓名：符林春

授予年度：2014年

学科分类：100506[医学-中医内科学] 1006[医学-中西医结合] 1005[医学-中医学] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：HIV 肠淋巴归巢 免疫活化 LPS 补肾健脾解毒法 

摘      要：目的： 本论文应用补肾健脾解毒法干预中国恒河猴艾滋病模型,探讨以下两方面内容： 1.探讨补肾健脾解毒法干预肠淋巴归巢的相关机制,从肠道粘膜免疫角度寻找中医药干预艾滋病的治疗策略。 2.探讨补肾健脾解毒法对免疫系统的过度活化影响的机制。 方法： 实验猴成功造模后,进行常规检测：体重、血常规、血生化、病毒载量、T淋巴细胞亚群情况以及血清T3(三碘甲腺原氨酸)、T4(甲状腺素)、COR(皮质醇)和β2-MG(血清β2微球蛋白),证明猴子已具备了脾虚证和肾虚证的特征。 具体研究内容如下： 1.肠相关淋巴组织活化情况及肠淋巴归巢受体表达研究：共16只实验猴,随机分为治疗组和模型对照组,每组8只。本实验在课题组前期研究成果上,进一步探讨补肾健脾解毒法干预艾滋病猴的肠淋巴归巢机制及干预免疫系统的过度活化机制。采用免疫组化技术检测补肾健脾解毒法干预,对猴模型回肠组织中的肠淋巴归巢相关受体α4β7、CCR9、αEβ7、CD62L及肠淋巴组织活化分子CD69的表达;用ELISA方法检测外周血CD62L血浆浓度变化。 2.外周血淋巴细胞活化及肠淋巴归巢受体表达研究：共15只实验猴,均经静脉感染SIVmac239,成功造模,随机分为三组：低剂量组、高剂量组和生理盐水对照组,每组5只猴。①探讨艾滋病猴急性期外周血T淋巴细胞的活化情况、肠淋巴归巢相关受体αEβ7、CCR9表达情况、CD62L血浆浓度变化情况;②深入探讨补肾健脾解毒法对艾滋病猴的免疫活化、肠淋巴归巢相关受体表达、CD62L血浆浓度变化、肠道炎症相关因子LPS变化的的影响。采用流式细胞术检测T淋巴细胞活化分子HLA-DR的表达;酶联免疫吸附法(ELISA)检测分别检测CD62L血浆浓度及LPS的血清浓度;检测时间点分别为感染前、给药前(感染11周)、给药2月及停药2月后的变化情况。 结果： 1.补肾健脾解毒法干预对艾滋病猴肠粘膜淋巴组织CD69表达影响 模型组100天与模型组基线点比较,回肠组织CD69分子表达量显著升高(P=0.000);用药50天与模型组基线点比较,CD69分子表达下降(P=0.032);用药100天与模型100天组比较,CD69分子表达显著下降(P=0.01);治疗100天与治疗50天比较,CD69分子表达显著升高(P=0.01),但是却显著低于同时间点的模型组表达量(P=0.01)。 2.补肾健脾解毒法干预对肠淋巴归巢受体表达影响 2.1回肠组织肠淋巴归巢受体CCR9分子表达情况 模型组100天与模型组基线点比较,回肠组织肠淋巴归巢受体CCR9分子表达量显著升高(P=0.005);用药50天与模型组基线点比较,CCR9分子表达显著下降(P=0.003);用药100天与模型组100天比较,CCR9分子表达下降(P=0.040);治疗100天与治疗50天比较,CCR9分子表达显著升高(P=0.000),但是却显著低于同时间点的模型组表达量(P=0.000)。 2.2回肠组织肠淋巴归巢受体αEβ7分子表达情况 模型组100天与模型组基线点比较,回肠组织肠淋巴归巢受体αEβ7表达量显著升高(P=0.003);用药50天与模型组基线点比较,αE β7表达显著下降(P=0.008);用药100天与模型组100天比较,αEβ7表达下降(P=0012);治疗100天与治疗50天比较,αEβ7表达显著升高(P=0.000),但是却低于同时间点的模型组表达量(P=0.0012)。 2.3回肠组织肠淋巴归巢受体α4β7分子表达情况 模型组100天与模型组基线点比较,回肠组织肠淋巴归巢受体α4β7分子表达量显著升高(P=0.002);用药50天与模型组基线点比较,a4B7分子表达下降(P=0.011);用药100天与模型组100天比较,a4β7分子表达显著下降(P=0.000);治疗100天与治疗50天比较,a4B7分子表达差异不显著,但是却明显低于同时间点的模型组表达量(P=0.000)。 2.4回肠组织肠淋巴归巢受体CD62L(L-选择素)分子表达情况 模型组100天与模型组基线点比较,回肠组织肠淋巴归巢受体CD62L分子计数有下降趋势(P0.05);用药50天与模型组基线点比较,CD62L分子计数显著升高(P=0.004);用药100天与模型组100天比较,CD62L分子计数显著升高(P=0.002);治疗100天与治疗50天比较,CD62L分子计数差异不明显,但是与同时间点的模型组表达量比较差异有显著统计学意义(P=0.002);CD62L分子阳性总面积治疗100天比治疗50天显著升高(P=0.041)。 3.补肾健脾解毒法干预对外周血CD62L的影响