我国辽宁病毒分离鉴定及其分子特征研究

作     者：唐承军 

作者单位：中国疾病预防控制中心 

学位级别：硕士

导师姓名：梁国栋;吕志

授予年度：2013年

学科分类：1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 100705[医学-微生物与生化药学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100103[医学-病原生物学] 10[医学] 

主      题：辽宁病毒 虫媒病毒 辽宁省 新疆 云南省 分子特征 

摘      要：辽宁病毒(Liao ning virus,LNV)属于呼肠孤病毒科(Reoviridae) Seadorna病毒属,为12节段dsRNA无包膜病毒。辽宁病毒于1997年首次分离自东北吉林白城附近的黑水镇的背点伊蚊,之后又陆续在我国的新疆、山西、青海、甘肃地区的背点伊蚊及凶小库蚊等多种蚊虫媒介中分离到。目前研究结果发现,辽宁病毒可分为2个基因型(Genotype1和Genotype2,代表株分别为NE97-12、NE97-31)。其中Genotype2自1997年分离自我国吉林地区后,至今未再次分离到。为进一步了解辽宁病毒分布变迁规律及分子特征,本课题选取辽宁、新疆及云南3省(自治区)的部分地区进行辽宁病毒调查,并对新分离的辽宁病毒进行分子特征分析。 1.我国辽宁、新疆及云南省辽宁病毒调查 选择适合蚊虫繁殖的季节,使用诱蚊灯等采集工具进行蚊虫标本采集,将采集到的蚊虫标本进行分类装管、冷链运输、液氮保存,经研磨后接种细胞C6/36细胞系及BHK-21细胞系进行病毒分离,细胞阳性分离物用分子生物学的方法进行鉴定。结果2012年8月,在辽宁省共采集到蚊虫标本3292只,其中中华按蚊(2552只,77.5%)为优势蚊种,从这些标本中共分离到2株辽宁病毒,分别来自中华按蚊、背点伊蚊。2011年5-8月,在新疆维吾尔自治区喀什地区采集到蚊虫标本26155只,从这些标本中共得到共得到19株辽宁病毒,分别来自黄背伊蚊、里海伊蚊及尖音库蚊。2011年4月及8月,在云南省西双版纳州共采获蚊虫5属29种共13337只,其中三带喙库蚊(10667只)为当地优势蚊种,在标本中未检测到辽宁病毒核酸也未分离到该病毒;也未检测到流行性乙型脑炎病毒、版纳病毒、甲病毒属、环状病毒等多种虫媒病毒核酸。以往研究结果表明辽宁病毒只分布在我国高纬度地区,本次在2011年云南省西双版纳州的蚊虫标本中未检测到该病毒的结果与此相符。这些新分离辽宁病毒中,新疆分离株与NE97-12同源性高于NE97-31,而辽宁省分离株与NE97-31的同源性最高。本研究系首次明确报道在尖音库蚊、黄背伊蚊、里海伊蚊及中华按蚊中分离到辽宁病毒。 2.新分离辽宁病毒分子特征研究 将新分离辽宁病毒株汇总,使用分离生物学方法测得所有毒株第10片段及第12片段的序列,使用生物信息学软件对毒株的核苷酸、氨基酸序列进行分子特征分析及系统进化分析。结果显示新疆新分离辽宁病毒株属Genotype1;辽宁省新分离株属Genotype2。系统进化分析结果显示新疆地区新分离辽宁病毒株属Genotype1,辽宁地区分离株属Genotype2;这是1997年首次在东北地区分离辽宁病毒近15年后再次分离到该病毒,同时也是1997年以后在我国首次分离到Genotype2毒株;此外初步判断该病毒在我国高纬度地区的分布特征,证实该病毒有与病毒分布特征相一致的进化特征。 本课题的意义 本课题对辽宁、新疆和云南省部分地区进行了辽宁病毒调查,在辽宁省首次分离到辽宁病毒,也是1997年后在我国再次分离到基因2型辽宁病毒株。此外在新疆分离到多株辽宁病毒。说明当地蚊虫中一直存在辽宁病毒的流行并进一步证实该病毒在我国高纬度地区分布的规律。这些数据丰富了我国辽宁病毒的研究,为了解辽宁病毒遗传变异及迁徙提供了重要的信息。对我国新分离到的辽宁病毒进行分子特征分析,明确了这些病毒的分类地位及与国内外分离株之间的分子生物学差异。此项研究是多年以来对当地虫媒病毒调查的基础上的持续研究,将为我国辽宁病毒的变迁,遗传变异及其与当地疾病流行关系提供重要的科学数据,疾病的预防与控制具有重要科学意义。