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首次在山西省虫媒病毒调查中检测并分离到南定病毒

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中华实验和临床病毒学杂志 2023年第1期37卷 25-29页

作者：刘升辉田晓东张维嘉郑红梅赵俊英许崇晓张雅丽付士红聂凯李樊代培芳殷启凯何英程璟侠王环宇山东第一医科大学(山东省医学科学院) 济南271016 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所、传染病预防控制国家重点实验室北京102206 山西省疾病预防控制中心太原030012

目的明确山西省五个地区虫媒病毒种类及其分布特征,对采集的蚊虫样本进行病毒的分离与鉴定。方法于2020年7~9月采集当地的蚊虫标本,利用实时荧光定量PCR法检测蚊虫标本中的8种虫媒病毒,通过细胞培养对其进行病毒分离,使用分子生物学和... 详细信息

目的明确山西省五个地区虫媒病毒种类及其分布特征,对采集的蚊虫样本进行病毒的分离与鉴定。方法于2020年7~9月采集当地的蚊虫标本,利用实时荧光定量PCR法检测蚊虫标本中的8种虫媒病毒,通过细胞培养对其进行病毒分离,使用分子生物学和生物信息学方法对病毒分离物进行鉴定和分析。结果在121批蚊虫样本中,检测到1批乙型脑炎病毒阳性,2批库蚊黄病毒阳性以及8批南定病毒阳性。分离到7株病毒分离物,编号为:SX-YJ-Cxp-4、SX-YJ-Ars-2、SX-YJ-Cxp-1、SX-LY-Cxp-10、SX-GP-Ars-5、SX-GP-Cxp-2、SX-GP-Cxp-4,鉴定均为南定病毒,对其中一株进行全基因组测序,结果显示:山西南定病毒分离株与云南南定病毒分离株属于同一进化分支。结论首次在山西省分离到南定病毒。

关键词：虫媒病毒南定病毒序列分析

2021年美国西尼罗病毒病和其他法定报告虫媒病毒病疫情概况

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疾病监测 2024年第4期39卷 517-519页

作者：龚震宇(摘译) 龚训良(审校) 浙江省疾病预防控制中心浙江杭州310051

西尼罗病毒(WNV)主要通过蚊虫传播,是美国大陆虫媒病毒病的主要原因,其他虫媒病毒也会引起散发的神经侵袭性疾病病例。2021年亚利桑那州发生了严重的西尼罗病毒感染暴发疫情,3个县报告的西尼罗病毒感染病例占美国所有报告病例总数的50%... 详细信息

西尼罗病毒(WNV)主要通过蚊虫传播,是美国大陆虫媒病毒病的主要原因,其他虫媒病毒也会引起散发的神经侵袭性疾病病例。2021年亚利桑那州发生了严重的西尼罗病毒感染暴发疫情,3个县报告的西尼罗病毒感染病例占美国所有报告病例总数的50%以上。美国西尼罗病毒感染神经侵袭性疾病的发病率(0.61/10万)超过了2010—2020年的中位发病率(0.39/10万),是2012年以来的最高水平。医护人员接诊无菌性脑膜炎或脑炎病例时应考虑病例是否为虫媒病毒感染,采集合适样本开展实验室检测,并及时向公共卫生当局报告病例。

关键词：西尼罗病毒虫媒病毒疾病监测发病率

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西昌市虫媒病毒核酸检测及其序列分析

中华检验医学杂志 2023年第2期46卷 143-149页

作者：陈易居何于雯杨怡铃孙劲杨振兴孟锦昕李楠许传志王静林昆明医科大学公共卫生学院云南省教育厅公共卫生与疾病防控重点实验室昆明650500 云南省畜牧兽医科学院云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室昆明650224 西昌学院资源与环境学院西昌615000

目的了解四川省西昌市蚊虫样本中虫媒病毒的流行情况,丰富四川省西南部地区虫媒病毒的活动规律和病毒遗传特征的研究数据。方法2018年6月对采集自西昌市3个村不同猪圈环境中的三带喙库蚊提取核酸,使用云南环状病毒属、版纳病毒属、西藏... 详细信息

目的了解四川省西昌市蚊虫样本中虫媒病毒的流行情况,丰富四川省西南部地区虫媒病毒的活动规律和病毒遗传特征的研究数据。方法2018年6月对采集自西昌市3个村不同猪圈环境中的三带喙库蚊提取核酸,使用云南环状病毒属、版纳病毒属、西藏环状病毒属(S7、S10)、黄病毒属、甲病毒属的特异性引物进行PCR检测,对阳性产物克隆测序并进行序列分析。结果共采集到蚊虫9012只,其中三带喙库蚊为优势蚊种,对采集到的三带喙库蚊分88批次进行扩增,分别检测出2株乙型脑炎病毒(JEV)、7株版纳病毒(BAV)、7株西藏环状病毒(TIBOV)和1株云南环状病毒(YOUV),序列分析结果显示,17株新检测病毒株均与云南分离株遗传关系接近,2株JEV位于GⅠ-b进化支;7株BAV为A2进化分支;7株TIBOV中,6株位于同一进化支;1株TOUV与云南分离株在同一进化支。结论西昌市的三带喙库蚊中存在携带JEV、BAV、YOUV及TIBOV等病毒的可能,其中JEV为GⅠ-b型病毒,BAV为A2型,为西昌市虫媒病毒的检测及分析提供了数据支持。

关键词：虫媒病毒分子诊断检测技术遗传库蚊

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云南省虫媒病毒与虫媒病毒病研究进展

中国人兽共患病学报 2022年第12期38卷 1117-1129页

作者：张海林云南省地方病防治所云南省自然疫源性疾病防控技术重点实验室大理671000

云南省为南亚热带气候,适于各类吸血节肢动物的生存繁殖及某些虫媒病毒的保存和传播。迄今,云南已分离到至少8科10属28种虫媒病毒,其中包括能引起人和/或家畜严重疾病的流行性乙型脑炎、登革、基孔肯雅、蜱媒脑炎、寨卡、辛德毕斯、巴... 详细信息

云南省为南亚热带气候,适于各类吸血节肢动物的生存繁殖及某些虫媒病毒的保存和传播。迄今,云南已分离到至少8科10属28种虫媒病毒,其中包括能引起人和/或家畜严重疾病的流行性乙型脑炎、登革、基孔肯雅、蜱媒脑炎、寨卡、辛德毕斯、巴泰、马亚罗、肯科伊、盖塔、蓝舌、坦布苏、阿卡斑和曼扎尼拉等病毒;还发现可能导致人、畜感染的新病毒如版纳病毒、云南环状病毒、芒市病毒,以及昆虫特异性病毒如浓核病毒、库蚊黄病毒、伊蚊黄病毒、伊蚊弹状病毒等,为国内已发现虫媒病毒种类最多的省份。加强虫媒病毒和虫媒病毒病调查研究及防控仍是云南省当前面临的重要任务。本文对近20年(2001-2020年)云南省虫媒病毒及其相关疾病研究进展及公共卫生意义做一综述。

关键词：虫媒病毒虫媒病毒病研究进展

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虫媒病毒与牛羊繁殖障碍性疾病

中国预防兽医学报 2016年第6期38卷 507-512页

作者：王芳齐瑛琳于力中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/牛羊传染病研究创新团队黑龙江哈尔滨150001

牛羊传染性疾病,在我国习惯上划分为烈性传染病口蹄疫、羊的小反刍兽疫及羊痘、人畜共患病布鲁氏杆菌病和牛结核以及多系统性传染病,后者包括以呼吸道疾病综合症为特征的呼吸系统疾病、以腹泻为特征的消化系统疾病和以流产为特征的繁殖... 详细信息

牛羊传染性疾病,在我国习惯上划分为烈性传染病口蹄疫、羊的小反刍兽疫及羊痘、人畜共患病布鲁氏杆菌病和牛结核以及多系统性传染病,后者包括以呼吸道疾病综合症为特征的呼吸系统疾病、以腹泻为特征的消化系统疾病和以流产为特征的繁殖障碍性疾病。繁殖障碍性疾病（Reproductive disorders diseases）即感染生殖系统的疾病,

关键词：繁殖障碍性疾病虫媒病毒烈性传染病疾病综合症人畜共患病小反刍兽疫牛结核阿卡斑病布鲁氏杆菌病中山病

云南西部边境地区虫媒病毒调查及其分子特征研究

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云南西部边境地区虫媒病毒调查及其分子特征研究

作者：杨怡铃昆明医科大学

学位级别：硕士

[背景]虫媒病毒是指一类在吸血节肢动物体内复制并通过吸血过程将病毒传播给宿主动物的病毒。人类、家禽、家畜以及野生动物被昆虫叮咬后被感染,出现发热、出血、脑炎等症状和疾病。虫媒病毒对全世界,尤其是发展中国家的人类和动物健... 详细信息

[背景]虫媒病毒是指一类在吸血节肢动物体内复制并通过吸血过程将病毒传播给宿主动物的病毒。人类、家禽、家畜以及野生动物被昆虫叮咬后被感染,出现发热、出血、脑炎等症状和疾病。虫媒病毒对全世界,尤其是发展中国家的人类和动物健康构成了极大的威胁,是一个主要的全球公共卫生问题。云南省位于中国的西南边界,与缅甸、老挝、越南毗邻,属热带和亚热带气候。由于其独特的地理位置和气候特征导致云南省不仅是境外输入虫媒病毒最多的省份,也是国内新发现虫媒病毒最多的省份之一。因此,在云南省西部边境开展系统的虫媒病毒调查,有助于为当地虫媒病毒的防控提供科学依据。[目的]在云南省西部边境地区开展媒介昆虫(蚊虫和蠓虫)及其携带病毒调查,了解该地区传播媒介及携带病毒的种类和分布;对新分离病毒进行分子鉴定,明确新分离病毒的分类地位;在此基础上,对一株新分离西藏环状病毒进行全基因测序和序列分析,从全基因组水平上明确新分离代表毒株的分子特征和遗传进化关系。同时,在当地开展动物血清流行病学调查,了解新分离病毒在家养动物中的感染和流行情况,为该地区虫媒病毒传染病的防治提供科学依据。[方法]1.2018年7月在云南省芒市、盈江、泸水、腾冲的采集蚊虫和蠓虫样本,采用形态学分类的方法对采集的媒介昆虫进行分类鉴定。2.将采集到媒介昆虫样本进行研磨,分别接种在BHK-21和C6/36细胞进行病毒分离。从阳性分离物上清中提取核酸,分别使用虫媒病毒特异性引物进行RT-PCR扩增,阳性产物送生工生物公司进行测序。使用Clustal X、DNAStar、Mega-X等生物软件进行序列分析。3.采用双链RNA病毒全长cDNA扩增技术(FLAC)对新分离TIBOV MS18C217-16株进行全基因组扩增,使用生物信息软件对其基因组结构与特征进行分析。同时观察不同血清型TIBOV MS 18C217-16株与DH13C120株在BHK-21、C6/36、VERO、PK15、HELA、MDBK等细胞中的增殖情况,绘制增殖曲线,比较不同血清型两株TIBOV生物学特征差异。4.选取2018年以来在云南省4个地区采集的680份动物血清,采用微量中和实验的方法检测这些动物血清中新分离TIBOVMS18C217-16株中和抗体。同时采用微量中和试验比较动物血清中不同血清型TIBOV(MS18C217-16株和DH13C120株)中和抗体滴度。对新分离病毒MS18C217-16采用不同血清型TIBOV病毒株DH13C120、SZ18、JCC637-2制备的特异性免疫腹水进行免疫中和试验。[结果]1.2018年在芒市、盈江、泸水、腾冲累计采集库蚊、按蚊、阿蚊、伊蚊4个属的8种蚊虫共计8581只。三带喙库蚊是芒市和盈江地区的优势蚊种,中华按蚊是泸水和腾冲地区的优势蚊种。采集蠓虫共计18296只,其中在芒市共采集到19种库蠓7396只,条带库蠓为优势蠓,构成比为59.79%;在泸水共采集到15种库蠓4602只,荒川库蠓为优势蠓,构成比为48.11%。2.蚊虫分为170个批次,蠓虫分为203个批次进行病毒分离,获得112株阳性病毒分离物,49株分离自蚊虫,63株分离自蠓虫。蚊虫和蠓虫病毒分离的批阳性率分别为28.82%和31.03%。四个地区病毒分离的批阳性率依次为芒市(51.45%)、泸水(22.73%)、盈江(7.41%)、腾冲(5.61%)。3.经过分子生物学鉴定,112批阳性分离物分别隶属于8科9属的10种病毒,包括 33 株 YUOV、83 株 TIBOV,6 株 BAV,5 株 NDiV,1 株 AKAV,53 株 MAV,2 株 CxFV,4 株 CppDNV,1 株 CuTLV,1 株 ArIFV。4.TIBOV分离株MS18C217-16的PAGE显示该病毒是10节段的dsRNA病毒,片段迁移模式为3-3-3-1。病毒基因组有19247 nt核苷酸序列,编码6616个氨基酸,其T3和OC1蛋白和与7株TIBOV的氨基酸同源性分别在93.9%～97.7%,27.7%～58%,提示MS18C217-16株可能是一株新型TIBOV。病毒的生物学特征研究提示 MS18C217-16 和 DH13C120 都能在 BHK-21、VERO、PK15、HELA、MDBK和C6/36等6种细胞中增殖,其中能在BHK-21、VERO、PK15细胞中产生病毒噬斑。5.动物血清流行病学调查结果显示,在勐腊和芒市的牛血清、山羊血清和猪血清,景洪和江城的猪血清中都检测到了 MS18C217-16毒株的中和抗体。四个地区的抗体阳性率依次为勐腊(23.86%)、景洪(12.73%)、芒市(8.11%)、江城(7.41%)。三种动物血清的抗体阳性率依次为山羊血清(38.46%)、猪血清(12.86%)、牛血清(3.72%)。MS 18C217-16株与DH13C120株抗体滴度的比较提示,20份MS18C217-16

关键词：云南西部边境蚊虫蠓虫虫媒病毒分离鉴定西藏环状病毒

海南省2017-2018年虫媒病毒的分离与鉴定

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中华流行病学杂志 2020年第2期41卷 236-243页

作者：范娜孙定炜程睿付士红曾林海吴群李善干何英雷雯雯李樊王环宇鲁晓晴梁国栋青岛大学医学院公共卫生学院职业卫生与环境卫生教研室 266071 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所病毒性脑炎室北京102206 海南省疾病预防控制中心寄生虫病防治科海口570203

目的了解海南省虫媒病毒种类及分布变化。方法于2017-2018年在海南省野外采集吸血昆虫标本,所有吸血昆虫标本实验室处理后用BHK-21细胞和C6/36细胞进行病毒分离,同时使用RT-PCR平行检测吸血昆虫标本中虫媒病毒基因。结果共采集到4属(库... 详细信息

目的了解海南省虫媒病毒种类及分布变化。方法于2017-2018年在海南省野外采集吸血昆虫标本,所有吸血昆虫标本实验室处理后用BHK-21细胞和C6/36细胞进行病毒分离,同时使用RT-PCR平行检测吸血昆虫标本中虫媒病毒基因。结果共采集到4属(库蚊、阿蚊、伊蚊、按蚊)15062只蚊虫和11360只蠓虫。采集的蚊虫中三带喙库蚊居多,占蚊虫采集总数92.88%(13990/15062)。经组织培养细胞共获得4株病毒分离物,其中3株乙型脑炎(乙脑)病毒、1株盖塔病毒,在5批三带喙库蚊标本中检测到乙脑病毒基因阳性。遗传进化分析结果显示这3株乙脑病毒和5批PCR筛检阳性的标本均属于基因1型乙脑病毒。当地乙脑病毒的最低感染率为0.57‰(8/13990)。在5批蠓虫标本中检测阿卡斑病毒基因阳性,当地阿卡斑病毒的最低感染率为0.44‰(5/11360)。基于病毒S基因和M基因序列的系统进化分析显示这5株阿卡斑病毒处于单独进化分支形成独特的地理分布特征。结论继1980年代以来,从海南省的蚊虫标本中再次分离到乙脑病毒和盖塔病毒、蠓虫标本中检测到阿卡斑病毒。应加强乙脑病毒、盖塔病毒和阿卡斑病毒对人畜动物感染状况及疾病负担的监测,以减少对当地公共卫生健康的危害。

关键词：虫媒病毒乙型脑炎病毒盖塔病毒阿卡斑病毒

中国动物虫媒病毒主要传播媒介库蠓种类及其分布

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中国热带医学 2022年第6期22卷 505-511页

作者：李苏胜王静林云南省畜牧兽医科学院云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室云南昆明650224

库蠓(双翅目:蠓科)是一种重要的医学和兽医学媒介昆虫,能通过叮咬动物和人传播蓝舌病病毒(bluetongue virus, BTV)、施马伦贝格病毒(Schmallenberg virus, SBV)、奥罗波克病毒(Oropouche virus, OROV)等多种病毒,危害动物和人类健康,造... 详细信息

库蠓(双翅目:蠓科)是一种重要的医学和兽医学媒介昆虫,能通过叮咬动物和人传播蓝舌病病毒(bluetongue virus, BTV)、施马伦贝格病毒(Schmallenberg virus, SBV)、奥罗波克病毒(Oropouche virus, OROV)等多种病毒,危害动物和人类健康,造成重大经济损失。全国34个省级行政区中,除了北京和澳门,其余都有库蠓分布的报道。我国现记载的库蠓属有12个亚属368种,分布在云南的库蠓种类最多,其中原野库蠓(C.homotomus)的分布最广。能传播或潜在具有传播病毒能力的库蠓至少有42种,其中我国有20种,在北京、天津、香港、澳门以外的各省(市、自治区)均有分布。为进一步了解传播虫媒病毒的库蠓种类及其分布情况,促进我国蠓传动物疾病的预防和控制,本文对我国动物病毒媒介库蠓的种类和分布情况进行综述,为动物虫媒病毒的研究提供依据。

关键词：库蠓地理分布虫媒病毒

常见虫媒病毒多重荧光定量PCR和NGS方法的建立及其初步应用

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常见虫媒病毒多重荧光定量PCR和NGS方法的建立及其初步应用

作者：赵恒昆明理工大学

学位级别：硕士

虫媒病毒是传播媒介为节肢动物,可导致人畜共患病的一类病毒。感染人类的虫媒病毒主要分布在黄病毒科、披膜病毒科和布尼亚病毒科,人类感染虫媒病毒轻则会出现流感样症状,重则会出现出血热和神经系统疾病。虫媒病毒在全球范围内广泛流行... 详细信息

虫媒病毒是传播媒介为节肢动物,可导致人畜共患病的一类病毒。感染人类的虫媒病毒主要分布在黄病毒科、披膜病毒科和布尼亚病毒科,人类感染虫媒病毒轻则会出现流感样症状,重则会出现出血热和神经系统疾病。虫媒病毒在全球范围内广泛流行,严重危害人类生命安全,给全球的卫生公共部门造成巨大压力,云南位于中国西南边陲,气候适宜蚊虫生长,虫媒病毒数量一直居于全国前列,因此建立一种完善的虫媒病毒监控和预警机制尤为重要。分子生物学方法已广泛应用于病原体检测,目前实时荧光定量PCR是针对虫媒病毒最主流的检测方法,但多数方法只针对一种病原体,操作繁琐且浪费试剂;基因组测序能在疫情中起到监测和流行病学调查的作用,随着测序技术的发展,基于二代测序(NGS)的宏基因组学方法已被用于病毒发现和诊断,但临床样本中的低载量病毒往往使病毒基因组覆盖率很低,目前少有针对虫媒病毒的NGS检测方法。基于此,我们引入多重PCR技术,建立了能快速筛查12种虫媒病毒的TaqMan一步法多重实时荧光定量PCR方法和能获取更多基因组信息的3种常见虫媒病毒的NGS检测方法。首先,我们针对寨卡病毒(ZIKV)、登革病毒(DENV)、乙型脑炎病毒(JEV)、森林脑炎病毒(TBEV)、黄热病毒(YFV)、基孔肯亚病毒(CHIKV)、新型布尼亚病毒(SFTSV)、西尼罗病毒(WNV)、巴泰病毒(BATV)、盖塔病毒(GETV)、克里米亚-刚果出血热病毒(CCHFV)和裂谷热病毒(RVFV)的保守区域设计引物和探针,用人的β-actin基因作为内质控,利用体外转录RNA标准品作为模板,成功建立了12种虫媒病毒的多重实时荧光定量PCR(multiplex-qPCR)检测方法。在单重实时荧光定量的基础上,根据病毒种属分类情况,经过调整和验证,multiplex-qPCR方法将12种虫媒病毒分为三组,A组包括(YFV、TBEV、GETV、RVFV),B组包括(DENV、CHIKV、SFTSV、JEV),C组包括(ZIKV、BATV、WNV、CCHFV)。multiplex-qPCR特异性验证表明,12组引物和探针之间没有交叉扩增反应,特异性强;灵敏性验证表明,A组中病毒的检测下限分别为YFV4.5×10 copies/μl、TBEV 4.89×10 copies/μl、GETV 4.76×10 copies/μl、RVFV6.5×10copies/μl,B组中病毒的检测下限分别为DENV 2.79×10 copies/μl、CHIKV 1.69×10 copies/μl、SFTSV 4.12×10 copies/μl、JEV 5.2×10 copies/μl,C组中病毒的检测下限分别为ZIKV 1.54×10 copies/μl、BATV 2.79×10 copies/μl、WNV 4.7 copies/μl、CCHFV 4.3×10 copies/μl,灵敏性较高;用三个不同稀释梯度的标准品进行批内和批间重复性试验,每个稀释度中的Ct值的变异系数都小于2.25%,重复性好。其次,在ZIKV、CHIKV、DENV共流行且临床症状相似的背景下,旨在确认感染与否、探索三种病毒基因多样性,我们针对ZIKV的E区、CHIKV的E1区和DENV1-4型的E区分别设计了18条、13条和52条特异性逆转录引物,同时还设计了6对、5对和23对多重PCR引物;用三种病毒核酸对各自引物进行验证,结果显示所有引物都能正常工作,将引物分成两个Pool进行多重PCR时,能得到较好的扩增效果,多重PCR引物特异性验证时仅有对应的病毒出现目的条带,引物特异性良好,灵敏性验证表明三种病毒的多重PCR引物具有与实时荧光定量PCR相当的灵敏性;测序结果:ZIKV病毒Reads占比为95.09%,测序深度为177347×,CHIKV病毒Reads占比为96.88%,测序深度为152665×,DENV1-4型病毒Reads占比分别为29.2%、25.92%、45.44%、18.53%,测序深度分别为61963×、57439×、87025×、39646×,三种病毒对参考基因组的覆盖度都达到100%,与对照组无统计学差异,富集起到了显著效果。最后,我们选取来自医院的20例具有虫媒病毒感染症状的临床样本,用本论文建立的两种方法进行检测和评价。结果发现,20例样本中有2例CHIKV感染,有18例DENV感染,其中还有2例是不同DENV血清型混合感染,22个检测出来的病原体中有16个在20×的覆盖深度阈值下对参考基因组达到100%的覆盖,其他6个病原体对参考基因组的覆盖率在83.8%到94.5%之间,所有样本的病毒Reads占比都达到了62.71%以上,表明建立的方法达到了良好的富集效果;将两种方法与Sanger测序进行比较,multiplex-qPCR和基于PCR的NGS方法灵敏性都要好于Sanger测序,且NGS方法还能检出Sanger测序不

关键词：虫媒病毒 TaqMan一步法多重实时荧光定量PCR 多重PCR 二代测序