Caspase-3抑制剂联合小剂量GC对脓毒症小鼠AKI TNF-α、NGAL及Bax、Bcl-2表达的影响

作     者：李任重 

作者单位：昆明医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：苏美仙

授予年度：2017年

学科分类：100218[医学-急诊医学] 1002[医学-临床医学] 1010[医学-医学技术（可授医学、理学学位）] 10[医学] 

主      题：脓毒症急性肾损伤 糖皮质激素 Caspase-3抑制剂 凋亡 

摘      要：[目的]脓毒症急性肾损伤(septic acute kidney injury,SAKI)是重症监护室中常见的一种危重疾病,其发病率及死亡率居高不下,但发病机制尚未明确。其中,细胞凋亡学说在脓毒症急性肾损伤中的作用越来越受到重视,多项临床及动物实验显示,脓毒症发生时,机体处于相对肾上腺皮质功能不全(relative adrenal insufficiency,RAI)的状态,小剂量糖皮质激素可以保护SAKI中的肾功能。本实验拟构建SAKI小鼠模型,采用Ac-DEVD-CHO(Caspase-3特异性抑制剂)联合小剂量甲强龙早期干预,通过ELISA检测小鼠血清中炎症因子TNF-α、急性肾损伤标志物NGAL(中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白,载脂蛋白-2)以及Western Blot检测肾脏凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2表达,比较二者单独干预与联合干预措施对SAKI小鼠模型的肾保护作用及机制,为临床治疗SAKI提供新的治疗靶点和理论依据。[方法]清洁级雄性C57BL/6小鼠72只,采用盲肠结扎穿孔(Cecal Ligation and Puncture,CLP)法,构建SAKI模型,随机分为6组(n=12),①假手术对照组(sham group);②盲肠结扎穿孔组(CLP group);③DMSO对照组(DMSO group);④小剂量甲泼尼龙早期干预组(GC group);⑤Caspase-3抑制剂Ac-DEVD-CHO早期干预组(CHO group);⑥Caspase-3抑制剂Ac-DEVD-CHO联合小剂量甲强龙组(CHO+GC group)。各组术后都给予37℃生理盐水0.3ml/10g股部皮下注射行液体复苏。六组小鼠分别于术后6h、12h、24h通过摘眼球法取血,使用ELISA方法测定血清中的TNF-α、NGAL浓度;同时各组使用磷酸盐缓冲液灌注后取出小鼠肾脏,使用Western-Blot方法测定肾脏中凋亡蛋白Bax、Bcl-2的表达。ELISA结果分析使用酶标仪在450nm波长下测量各孔的光密度(optical density,OD)值,Western-Blot条带图像灰度值测量分析采用Gel-pro软件包分析。数据统计分析采用SPSS20.0版软件包(SPSS Company,Chicago,IllinoisUSA)进行;数据均以均数土标准差(x±s)表示,统计方法采用重复测量资料的方差分析,P≤0.05为差异有统计学意义。[结果]1.各组小鼠血清TNF-α及血清NGAL结果:6h、12h、24h小鼠CLP组和DMSO对照组血清TNF-α及血清NGAL表达无明显差异(P0.05)。6hCLP组、CHO组TNF-α较Sham组有明显升高(PO.05);12h、24hSham组血清TNF-α较6h组有升高趋势,但无统计学差异(P0.05);24hGC组较24hCLP组有明显降低(P0.05)。12hCLP组较6hCLP组血清NGAL有明显升高(P0.05),各个时间组CLP组较Sham组NGAL都有明显升高(P0.05);CHO组较CLP组血清NGAL有明显降低(P0.05)。2.各组小鼠肾组织凋亡相关蛋白Bax及Bcl-2表达结果:6h和12h的Bax/actin比值比较中,CLP组最高,GC+CHO组最低,其中CLP组与Sham组比较Bax表达升高有统计学意义(P0.05)。24h的Bax/β-actin比值比较中,Sh