肾衰状态下硫酸吲哚酚血浓度改变及乳酸菌基因工程菌对其降解的研究

作     者：蒋亚芬 

作者单位：中南大学 

学位级别：硕士

导师姓名：蒋云生

授予年度：2012年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100210[医学-外科学(含：普外、骨外、泌尿外、胸心外、神外、整形、烧伤、野战外)] 10[医学] 

主      题：慢性肾脏疾病 尿毒症毒素 硫酸吲哚酚 高效液相色谱-荧光法 5/6肾切除 基因 乳酸杆菌 

摘      要：第一部分慢性肾功能不全患者硫酸吲哚酚血浓度改变及相关分析 目的 探讨不同肾衰程度、不同治疗方法慢性肾衰患者的血硫酸吲哚酚的浓度改变及其与其他生化指标的相关关系。 方法 1.实验对象：选择20例健康对照组,75例不同肾功能的慢性肾脏疾病患者（其中有19例为规律透析患者）作为研究对象。按改良的MDRD方法计算肾小球滤过率,再根据美国国家肾脏病基金会的“肾脏病生存质量指南（K/DOQI）对慢性肾功能不全患者进行CKD分期。 2.实验分组： 1)按CKD分期进行分组：CKD3期（7例）;CKD4期（15例）;CKD5期（53例）;对照组（20例）。 2)按治疗方法进行分组：胃肠道治疗组（56例）;血液透析组（19例）;对照组（20例） 3.实验步骤： 1)分别收集一般资料及临床生化指标;2)清晨收集同一入选对象的血、尿、便标本,离心留取上清液,保存备用;3)应用高效液相色谱-荧光法分别检测血、尿、便中硫酸吲哚酚浓度;结果：X±S 1小样本人群血、尿中硫酸吲哚酚水平为0.085±0.064,18.761±12.248;2.经CKD分期： 1)与健康对照组相比较：血硫酸吲哚酚CKD3期0.127±0.122ug/ml, P=0.246;CKD4期0.482±0.533ug/ml, P.0001;CKD5期2.745±2.493ug/ml, P0.0001。尿硫酸吲哚酚CKD3期3.616±2.885ug/ml, P.0001;CKD4期3.184±3.045ug/ml, P0.0001;CKD5期2.540±1.684ug/ml, P0.0001。 2)与CKD3期相比较：血硫酸吲哚酚CKD4期0.482±0.533ug/ml, P=0.026;CKD5期2.745±2.493ug/ml, P0.0001。尿硫酸吲哚酚CKD4期3.184±3.045ug/ml, P=0.771;CKD5期2.540±1.684ug/ml, P=0.199。 3)与CKD4期相比较：血硫酸吲哚酚CKD5期2.745±2.493ug/ml, P0.0001。尿硫酸吲哚酚CKD5期2.540±1.684ug/ml, P=0.465 3.经不同治疗方法分组： 1)与健康对照组相比较：血硫酸吲哚酚胃肠道治疗组1.484±1.315ug/ml, P.0001;血液透析组5.002±2.532ug/ml, P0.0001。尿硫酸吲哚酚胃肠道治疗组2.422±1.680ug/ml, P.0001;血液透析组3.879±2.249ug/ml, P.0001。 2)与胃肠道治疗组相比较：血硫酸吲哚酚血液透析组5.002±2.532ug/ml, P.0001;尿硫酸吲哚酚血液透析组3.879±2.249ug/ml, P0.01。 4.血硫酸吲哚酚与血尿素氮（r=0.665,P0.0001）、血肌酐（r=0.789,P0.0001）及甘油三酯（r=0.222,P=0.032）呈明显正相关,与血红蛋白（r=—0.548,P0.0001）、肾小球滤过率（r=-0.807,P0.0001）及低密度脂蛋白胆固醇（r=-0.35,P=0.002）呈明显负相关。 结论 1.不同时期的CKD患者硫酸吲哚酚血浓度存在明显差异,其血浓度与eGFR呈负相关,尿浓度与eGFR呈正相关。 2.血液透析组血IS水平较胃肠治疗组明显高。 3.血液IS浓度与TG呈正相关,与LDL-C和Hb呈负相关,可能参与了慢性肾脏病患者心血管事件和肾性贫血的发生和发展。 第二部分乳酸菌基因工程菌对硫酸吲哚酚的分解作用 目的 通过体内外实验,观察乳酸菌基因工程菌对硫酸吲哚酚的分解作用。 方法 1.体外试验：选择我院血液净化中心规律透析患者19例,收集血标本,按乳酸菌基因工程菌：血清（1：4C/C）,于37℃厌氧培养24小时后,用HPLC-GLU法检测培养前后血硫酸吲哚酚浓度。 2.体内试验：雄性6周龄SD大鼠随机分2组：1.对照组（n=14）：无菌生理盐水2mL/d,灌胃,1次／天;2.实验组（n=21）：乳酸菌基因工：程菌1.5×108cfu/ml×2ml/d,灌胃,1次／天;两组大鼠均行5/6肾切除手术。两组大鼠待肾衰模型成功,于给药4周后处死,给药前及4周后留取血尿便标本,用HPLC-FLU测定给药前后标本中硫酸吲哚酚浓度,观察乳酸菌基因工程菌是否对实验肾衰大鼠体内硫酸吲哚酚具有降解能力。 结果：x±S 1.乳酸菌基因工程菌处理24小时后,尿毒症患者离体血清处理前后硫酸吲哚酚水平分别为5.6282±2.4637