新疆葡萄树伤流液抗氧化活性及其检测方法的研究

作     者：阿吉姑·阿布都热西提 

作者单位：新疆医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：买尔旦·马合木提;艾尔肯·依不拉音

授予年度：2008年

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：葡萄树伤流液 抗氧化活性 羟自由基 PAR[4-(2-吡啶偶氮)-间苯二酚] 

摘      要：目的:建立一种适合于检测水溶性物质抗氧化活性的简便方法,用该方法检测并比较新疆不同产地葡萄树伤流液的体外抗氧化活性。对活性显著葡萄树伤流液进行理化特性研究。方法:(1)用Mn与HO作用产生的羟自由基(·OH)迅速氧化分解PAR[4-(2-吡啶偶氮)-间苯二酚]与Mn离子反应生成的螯合物,在极短时间内使其500nm处的吸光度发生显著变化,从而可间接快速检测·OH的产生量;优化了反应体系中的pH、[PAR]、[Mn ]和[HO]等实验条件,并考察验证该方法的重现性。为验证该方法的可行性,以维生素C为基准物质,采用建立的方法测定维生素C清除羟自由基能力,将其结果与羟自由基试剂盒法,二苯代苦味肼基自由基(DPPH·)法进行比较。(2)对新疆葡萄树伤流液的理化特性进行研究;采用Mn-HO-PAR分光光度法及超氧阴离子自由基(O2-·)试剂盒评价不同产地葡萄树伤流液对·OH和O2-·的清除能力。(3)考察前处理、温度等对和田红葡萄树伤流液抗氧化活性的影响;研究和田红葡萄树伤流液在不同萃取溶剂中的抗氧化活性。(4)对和田红葡萄树伤流液中的抗氧化物质进行定性分析。结果:(1)建立的Mn-HO-PAR法稳定性好,操作简便、快速,可作为一种简便的体外筛选抗氧化剂的方法。Mn-HO-PAR法、DPPH·法、羟自由基试剂盒法测得维生素C的IC50分别为0.013 mg·mL-1 ,0.005 mg·mL-1 ,0.200 mg·mL-1。(2)葡萄树伤流液显弱酸性;在205、215nm处有较强的吸收,在250-270nm之间有较弱吸收,紫外吸收特性具有产地差异性,其中和田红葡萄树伤流液的吸收强度高于其它地区葡萄树伤流液;和田、阿图什和喀什红葡萄树伤流液以及吐鲁番无核白葡萄树伤流液对·OH的清除率分别为73.36%、57.15%、50.58%、32.45%,Vc(0.01 mg·mL-1)为33.28%;而对O2-·的清除率分别为24.79%、27.78%、29.81%、18.82%、Vc(0.15 mg·mL-1)为44.19%。(3)和田红葡萄树伤流液清除·OH能力具有极强的热稳定性;经乙醚、石油醚萃取后其无机相对·OH的清除率分别为67.71%、70.14%。(4)和田红葡萄树伤流液在糖类及三萜皂苷类专属性反应中为阳性,其理化性质与黄酮类及葡萄中常见的相关化合物的理化特性相比均有差异。结论:(1)本文所建立的检测方法中,Mn-HO体系能产生较强的·OH,可用于抗氧化物质清除·OH活性的测定。(2)葡萄树伤流液对·OH的清除能力强,但对O2-·的清除能力较弱,其抗氧化活性随葡萄品种、产地、生态气候条件的不同有所差异,结果表明和田红葡萄树伤流液清除·OH能力最强。(3)和田红葡萄树伤流液对·OH的清除能力受温度的影响小,具有极强的热稳定性;其中抗氧化活性物质极性大,其主要性质与常见的抗氧化物质性质不同,具体的有效成分有待进行进一步的研究。