养肝益水颗粒治疗高血压早期肾损害的临床观察及实验研究

作     者：付军 

作者单位：安徽中医药大学 

学位级别：硕士

导师姓名：戴小华

授予年度：2014年

学科分类：1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：养肝益水颗粒 高血压早期肾损害 自发性高血压大鼠 ET NO MMP-1 TIMP-1 JAKs/STATs通路 

摘      要：目的：观察养肝益水颗粒对高血压病早期肾损害患者临床疗效、动态血压、尿MA、β2-MG及血浆ET、NO水平变化，以及对自发性高血压大鼠(SHR)血压，血Scr、BUN，尿微量蛋白，肾脏病理，肾组织胶原蛋白含量相关酶（MMP-1、TIMP-1），肾脏p-JAK1、p-JAK2、p-STAT1、p-STAT3蛋白表达水平变化及STAT1、STAT3mRNA表达的影响，阐述高血压早期肾损害发病机制，以评价养肝益水颗粒作用环节及途径，探讨其疗效机制，为养肝益水颗粒防治高血压早期肾损害提供依据。 方法：1.临床观察：选择70例符合中医辨证的高血压病早期肾损害患者，随机分为治疗组和对照组。两组均给予常规降压治疗。治疗组同时加服养肝益水颗粒。两组疗程均为4周。分别于治疗前和治疗4周后观察中医证候积分值及动态血压变化，并检测尿MA、β2-MG及血浆ET、NO水平变化情况。 2.动物实验：将64只SHR编号后随机分为4组，即养肝益水颗粒高、低剂量治疗组、贝那普利对照组、模型组，每组均16只，同时选取16只WKY大鼠作为对照。1.采用大鼠尾动脉血压测定仪测量实验前及药物干预后第6周、12周各组大鼠的血压值;2.用自动生化分析仪检测实验前、实验后各组大鼠的血肌酐及尿素氮;3.采用放免法测定实验前后各组大鼠的尿MA及尿β2-微球蛋白;4.实验后采取PAS染色制作各组大鼠的肾脏标本，光镜下观察肾小球及肾小管间质的病理变化;5.采用免疫组织化学法检测实验后各组大鼠肾组织中MMP-1、TIMP-1的含量;6.采用Westernblot检测试验后各组大鼠肾脏p-JAK1、p-JAK2、p-STAT1、p-STAT3蛋白表达;7.采用RT-PCR检测试验后各组大鼠肾皮质STAT1、STAT3mRNA表达水平;8.采用SPSS17.0软件包进行统计学处理。 结果：1.临床观察：1.治疗前两组中医证候积分无显著性差异（p0.05），治疗后中医证候积分治疗组较对照组下降明显（p0.05)。治疗后治疗组此两项指标较对照组显著降低(p0.05）。治疗后，两组ET均较前明显下降（p0.05）。3.治疗前后各组SHR尿MA、尿β2-MG明显高于WKY大鼠（p﹤0.01）;治疗后各治疗组SHR尿MA、尿β2-MG均降低，与模型组相比差异明显（p﹤0.01）;低剂量中药组与贝那普利组相比，其差异无统计学意义（p0.05），但高剂量中药组与低剂量中药组、贝那普利组相比有明显差异（p 0.05，p 0.01）。4.治疗后模型组大鼠较正常组大鼠肾小球硬化更明显，而各治疗组仅有轻微的肾小球硬化表现。5.模型组MMP-1表达比正常组减弱，且分布面积减少（p0.05）;低剂量中药组积分光密度与模型组相比，差异无统计学意义（p0.05）;高剂量中药组、贝那普利组MMP-1的表达比模型组增强，且分布面积增加（p0.05）。模型组TIMP-1表达比正常组增加（p0.05）;低剂量中药组及贝那普利组与模型组相比，差异无统计学意义（p0.05）;高剂量中药组TIMP-1表达比模型组减弱，差异有统计学意义（p0.05）。6.与对照组相比，模型组大鼠肾小球p-JAK1、p-JAK2、p-STAT1和p-STAT3蛋白表达水平均增高（p均0.01）。与模型组相比，中药高剂量组大鼠肾小球p-STAT1和p-STAT3表达明显下调（p 0.05）。实验后模型组SHR肾皮质STAT1、STAT3mRNA表达明显高于WKY大鼠（p﹤0.01）;各治疗组均能明显降低SHR肾皮质STAT1、STAT3mRNA的表达（p﹤0.01），其中低剂量中药组与贝那普利组