塞来昔布联合奥沙利铂对人结肠癌HCT-116细胞的增殖和凋亡的影响

作     者：丁闯 

作者单位：苏州大学 

学位级别：硕士

导师姓名：胡浩

授予年度：2010年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：塞来昔布 结肠癌 奥沙利铂 survivin VEGF 

摘      要：目的:探讨选择性环氧化酶-2(COX-2)抑制剂塞来昔布(Celecoxib)联合奥沙利铂(Oxaliplatin)对人结肠癌HCT-116细胞增殖和凋亡的影响,并初步探讨其可能的作用机制,为结肠癌的药物治疗提供依据。 方法:(1)将Celecoxib和Oxaliplatin单独及联合作用于结肠癌细胞系HCT-116细胞,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测吸光度值,计算对照组和各实验组细胞的生长抑制率。(2)应用流式细胞仪(FCM)研究Celecoxib对结肠癌HCT-116细胞周期的作用;Celecoxib和Oxaliplatin及联合药物组对结肠癌HCT-116细胞凋亡作用,计算细胞凋亡率;倒置及共聚焦显微镜观察细胞形态学变化。(3)RT-PCR法检测单药组及联合药物组作用于结肠癌HCT-116细胞后survivin、VEGFmRNA表达水平的变化(4)Western Blot法检测survivin及VEGF在蛋白水平的表达。 结果:(1)MTT法显示Celecoxib组,Oxaliplatin组及联合用药组均可抑制HCT-116细胞的生长,呈时间和剂量依赖性,实验组与对照组及各实验组之间差别均有统计学意义(P1.15)。(2)流式细胞术检测后发现①HCT-116细胞经Celecoxib作用48小时后可见细胞周期S期明显抑制,且随着浓度的增加HCT-116细胞周期G0/G1期比例增加,S期细胞比例下降,具有统计学意义(P0.05)。②Celecoxib组,Oxaliplatin组及联合药物组作用48小时后,均能有效诱导HCT-116细胞凋亡,且在上述各浓度联合应用时具有协同效应。(3)RT-PCR检测表明:Celecoxib组和联合药物组作用48h后survivin、VEGF mRNA表达明显低于对照组(P0.05)。(4)Western Blot法结果显示Celecoxib组和联合药物组作用于结肠癌HCT-116细胞48h后,细胞中的VEGF、Survivin蛋白表达下降(P0.05)。 结论:(1)Celecoxib能抑制体外培养的人结肠癌HCT-116细胞生长,并呈时间和剂量依赖性;Celecoxib能使细胞发生凋亡并使细胞周期阻滞于G0/G1期。(2)Celecoxib对HCT-116细胞生长抑制和诱导凋亡作用可能与survivin和VEGF表达下调有关。(3)Celecoxib与Oxaliplatin联合应用后,具有协同抑瘤作用。