人参皂苷Rg1对小鼠非酒精性脂肪肝的改善作用和机制研究

作     者：徐雅姝 

作者单位：重庆医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：黄文祥

授予年度：2018年

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：人参皂苷Rg1 非酒精性脂肪肝 氧化应激 内质网应激 炎症小体 

摘      要：目的:非酒精性脂肪肝已经成为在世界范围内的最常见的慢性肝病,研发能有效、安全治疗NAFLD的药物已经成为大家聚焦的热点。人参皂苷Rg1是从人参中提取的活性成分,已有研究证实其有抗炎,抗氧化,神经保护等的多重功效。然而,Rg1对NAFLD的作用还没有相关的报道。本研究采用高脂饮食喂养C57/BL建立小鼠的NAFLD模型,使用人参皂苷Rg1进行药物干预,并将二甲双胍作为阳性对照药物。以探讨人参皂苷Rg1对高脂饮食诱导的小鼠NAFLD的改善作用以及可能的作用机制,为治疗NAFLD作新的探索。方法:1.选取42只7-8周健康条件良好的C57BL/6雌性小鼠寄养在SPF级别动物实验中心,适应性喂养于光照12h、恒温26℃的环境中。1周后,将小鼠随机分为5组:对照组,模型组,Rg1低剂量组,Rg1高剂量组、二甲双胍组。对照组和模型组每组各9只小鼠,其余小组每组各8只小鼠。对照组给予普通饲料喂养,其余各组均使用高脂饲料喂养,让所有小鼠自由地摄取水和食物,持续喂养16周。造模16周后,每组小鼠喂养条件不变,对照组和模型组给予0.9%生理盐水(20ml/kg/d)灌胃,Rg1低剂量组给予人参皂苷Rg1(20mg/kg/d)灌胃,Rg1高剂量组给予人参皂苷Rg1(40mg/kg/d)灌胃,二甲双胍组给予二甲双胍(150mg/kg/d)灌胃,持续治疗4周。2.20周末,禁食不禁饮12h后称取小鼠体质量,收集血液和肝脏组织标本。检测血清AST、ALT、TG、TC、HDL-C、LDL-C;肝组织切片HE染色观察肝脏病理和脂肪变性程度;利用小鼠的肝组织匀浆测定SOD活力、MDA与FFA的含量;荧光定量PCR(Real-timePCR)和Western blot检测技术测定内质网应激与炎症小体各相关基因的表达;使用酶联免疫吸附(Elisa)法分析小鼠血清中细胞因子IL-18的浓度。3.所有实验数据采用均数±标准差(x±s)的方式表达,使用SPSS20.0软件进行统计分析。单因素方差分析比较多组间的差异。认为P0.05)。2.人参皂苷Rg1对NAFLD小鼠肝脏脂肪变性程度的影响肝脏HE染色可见,对照组肝细胞形态正常,汇管区未见明显的炎性细胞或纤维组织增生,未见明显的脂肪变性、坏死;模型组的肝组织几乎被脂肪空泡所取代,肝细胞气球样变性,汇管区内有炎性细胞浸润,未见明显纤维组织增生;Rg1治疗组小鼠肝组织脂肪空泡散在分布,未见明显的炎性细胞或纤维组织增生。从各组脂肪变程度积分来看,模型组脂肪变性程度明显高于对照组(P0.05);而Rg1治疗组与模型组比脂肪变性程度有明显的减轻(P0.05)。3.人参皂苷Rg1对NAFLD小鼠抗氧化能力和脂肪酸β氧化蛋白表达的影响:相比对照组而言,模型组小鼠肝组织内的SOD活力有明显降低趋势,MDA、FFA含量明显增高(P0.05);相比模型组而言,Rg1治疗组小鼠肝组织内的SOD活力升高、MDA、FFA含量降低(P0.05)。模型组脂肪酸β-氧化蛋白PPARα的表达与对照组相比显著降低,Rg1治疗后PPARα蛋白表达量明显增高(P0.05)。4.人参皂苷Rg1对NAFLD小鼠内质网应激相关因子mRNA及蛋白表达的影响:与对照组相比,模型组的内质网应激相关因子GRP78、CHOP、caspase12的mRNA及蛋白表达均有明显升高(p0.05);与模型组相比,Rg1治疗后组GRP78、CHOP、caspase12的mRNA表达及蛋白表达均有不同程度的减少。5.人参皂苷Rg1对NAFLD小鼠的炎症相关因子表达的影响:模型组的NLRP3的mRNA及蛋白表达量以及IL-1β和Cleaved IL-1β的蛋白表达量与对照组相比均明显升高(p0.05);Rg1治疗组的上述指标模型组相比,均有不同程度的降低。模型组炎症因子IL-18的血清浓度与对照组相比明显增高(p0.05);Rg1治疗组的IL-18的血清浓度与模型组相比显著降低(p0.05)。结论:1.人参皂苷Rg1能够控减轻小鼠的体质量和肝脏湿重,降低血清转氨酶及TG水平,减轻肝脏脂肪变性,具有改善非酒精性脂肪肝的作用。2.人参皂苷Rg1能够降低肝