康莱特对UVB照射后人皮肤成纤维细胞MMP1,MMP3的表达影响

作     者：曹晓佳 

作者单位：天津医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：张理涛

授予年度：2012年

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 1002[医学-临床医学] 100602[医学-中西医结合临床] 100206[医学-皮肤病与性病学] 10[医学] 

主      题：薏苡仁 基质金属蛋白酶 成纤维细胞 光老化 实时荧光定量 酶联免疫吸附试验 

摘      要：目的：本研究通过观察中药薏苡仁提取物康莱特(KLT)对中波紫外线(ultravioletB,UVB)照射的体外培养人皮肤成纤维细胞的基质金属蛋白酶1、3(Matrix Metallo Proteinases, MMP1、MMP3) mRNA及蛋白表达的影响,进一步探讨康莱特(KLT)是否抗光老化的药理作用。 方法：采用酶消化法和组织块法培养人皮肤成纤维细胞;MTT法检测康莱特对人皮肽成纤维细胞增殖的影响;用不同辐照剂量UVB照射细胞后用实时荧光定量技术(RT-PCR)检测MMP1,MMP3mRNA表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测MMP1, MMP3蛋白水平;30mJ/cm2UVB照射细胞后分组分别加入1、2.5、5μL/mL康莱特基质及康莱特,用同上方法检测MMP1,MMP3mRNA及蛋白水平。 结果：人皮肤成纤维细胞倍增时间较短,0-1d为潜伏期,1-3d为细胞增殖期,3-5d为对数生长期而5-7d为平台期。第6代之后细胞逐渐失去活力,生长缓慢,形态不规则。经MTT法检测加入不同浓度的康莱特细胞组结果显示与未加康莱特组比较,差异无统计学意义(p0.05)。30mJ/cm2UVB照射细胞组的MMP1, MMP3mRNA及蛋白表达水平与无UVB照射组的差异有统计学意义(p0.05)。30mJ/cm2UVB照射细胞组加入不同浓度基质及康莱特MMP1, MMP3mRNA及蛋白表达水平与对照组的差异有统计学意义(p0.05)。 结论：人成纤维细胞可在较短时间内获得,第2代到第5代细胞增殖能力较强且生长稳定,宜用于实验。康莱特对人皮肤成纤维细胞的增殖无影响。康莱特可有效降低UVB照射后的人皮肤成纤维细胞MMP1, MMP3mRNA及蛋白的表达,且有剂量-效应关系。所以我们推测其有抗光老化的药理作用。