头孢卡品人体内定量分析方法及药代动力学研究
作者单位：吉林大学
学位级别：硕士
导师姓名：顾景凯
授予年度：2013年
学科分类：1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100706[医学-药理学] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学]
摘 要：目的：为了测定10名健康受试者口服头孢卡品酯颗粒低、中、高剂量以及多次给药后，在人体血浆中头孢卡品浓度，本研究建立了人体血浆中头孢卡品浓度的液相色谱-质谱联用(LC-MS/MS)测定方法。通过阐明口服给予头孢卡品酯颗粒剂后，头孢卡品在人体内的药代动力学特点，为今后进一步的临床试验提供数据支撑，也为临床合理用药提供可靠依据。 研究方法：头孢卡品血浆样品使用液-液萃取法(LLE)提取，提取试剂为乙酸乙酯，最后取10μL进行LC-MS/MS分析。液相条件选择Agilent公司生产的规格为4.6×150mm、粒径5μm、孔径100的Zorbax TC-C18色谱柱;流动相组成为乙腈-0.1%甲酸水溶液，比例为25:75(v/v)，流速为1.0mL/min。质谱检测采用电喷雾离子化(ESI)源、正离子检测和多重反应监测(MRM)模式，同时监测头孢卡品和内标(IS)八氢氨吖啶(ctahydroaminoacridine，OHA)的离子反应m/z454.1→m/z208.0、m/z203.1→m/z175.1定量。 对所建立的分析方法进行方法确证，分别考察了专属性、线性范围、准确度、精密度、最低定量下限(LLOQ)、提取回收率、基质效应、样品稳定性等指标。 使用上述测定方法，对10名健康受试者分别口服给予50mg、100mg、200mg三个剂量以及多次口服给予50mg头孢卡品酯颗粒后采集的血浆样品进行分析测定。获得浓度数据后，利用DAS3.0软件进行药代动力学参数的计算。并使用SPSS16.0统计分析软件对主要药代动力学参数进行统计分析。 结果：研究建立的人体血浆中头孢卡品浓度的LC-MS/MS测定方法，灵敏、快速、稳定。LLOQ为0.025μg/mL，线性范围为0.025-7.5μg/mL，分析时间为3.5min，使用血浆样品体积为50μL。方法确证结果表明，方法的专属性良好，不受内源性或其他杂质干扰;方法所测样品浓度相对误差(R.E.)均在4.47%以下，准确度良好，日内、日间精密度相对标准偏差(RSD)均小于15%，;头孢卡品低、中、高三个浓度(0.075、0.75、6μg/mL)的提取回收率分别为90.33±6.86%，92.95±4.28%，85.88±2.44%;内标八氢氨吖啶的提取回收率为95.68±3.37%;低、中、高三个浓度(0.075、0.75、6μg/mL)的基质效应分别为103.69±9.38%，97.68±13.01%，100.49±11.57%;内标八氢氨吖啶的基质效应为97.89±6.92%;血浆样品室温放置1.5h、反复三次-80°C下冰冻并在室温下解冻、血浆样品处理后室温放置4h、血浆样品-80°C冰冻放置30天、头孢卡品和内标八氢氨吖啶储备液室温放置4h和-20°C放置17h，样品的相对误差均小于±15%。 根据血浆样品测定结果得到药代动力学参数。低、中、高剂量和多次给药下的平均药代动力学参数如下：Cmax分别为：0.61±0.18μg/mL、1.20±0.39μg/mL、1.76±0.79μg/mL及0.60±0.16μg/mL;t1/2z分别为：1.42±0.32h、1.36±0.25h、1.45±0.36h及1.25±0.16h;Tmax分别为：2.15±0.53h、2.00±0.67h、3.00±0.97h及2.45±0.44h;AUC0-t分别为：1.91±0.44μg/mL*h、3.80±1.08μg/mL*h、6.84±2.74μg/mL*h及1.92±0.49μg/mL*h;AUC0-∞分别为：1.93±0.45μg/mL*h、3.84±1.10μg/mL*h、6.97±2.78μg/mL*h及1.93±0.49μg/mL*h;MRT分别为：3.20±0.39h、3.04±0.36h、3.81±0.51h及2.97±0.29h;Vz/F分别为：54.95±5.11L、53.23±12.63L、67.55±28.99L及49.84±14.80L;CLz/F分别为：27.43±7.59L/h、27.70±6.66L/h、32.09±9.98L/h及27.76±8.69L/h。 通过统计分析，头孢卡品在人体内的AUC0-t、AUC0-∞、Cmax分别与给药剂量之间具有显著的线性相关性。相关系数(r)及P值分别为0.779(P=0.0000.05);CLz/F在给药剂量为50mg-200mg之间具有显著性差异(P=0.0010.01);Tmax仅在给药剂量为100mg-200mg之间具有
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